生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,属于人类肠道正常厌氧菌群(占健康人肠道厌氧菌总量的 5%-10%),常规厌氧实验室规范操作(厌氧手套箱或厌氧罐培养、操作后器具高压灭菌)下,对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康成人粪便样本,其生物学特性与肠道内天然定植的迟缓艾格氏菌高度一致,能精准模拟肠道厌氧环境中的代谢行为(如降解复杂多糖、转化药物前体),是研究肠道厌氧菌与宿主健康、药物相互作用的理想模式菌株。
形态与培养特性:属于革兰氏阳性厌氧杆菌,具有典型厌氧菌形态与严格厌氧培养需求,与需氧菌差异显著:
显微镜形态:菌体呈细长杆状,直径 0.5-0.8μm,长度 2-5μm,常单个、成对或呈短链状排列(链长 2-4 个菌体),无芽孢、无鞭毛(不具备运动能力),革兰氏染色呈均匀紫色(着色稳定,无两极浓染现象),部分陈旧培养物可能出现轻度脱色(需新鲜培养物用于鉴定);
培养要求:为严格厌氧菌,需在无氧环境(含 85% N₂、10% H₂、5% CO₂)中培养,最适培养基为强化梭菌琼脂(RCA)、脑心浸液厌氧琼脂(BHI 厌氧琼脂,添加维生素 K₁与血红素),无需添加抗生素(对多数抑菌剂敏感);最适生长温度 37℃(与人体肠道温度一致),生长速度缓慢(区别于需氧菌),37℃厌氧培养 48-72 小时才形成明显菌落,无延迟生长期但繁殖代时长达 6-8 小时(需严格控制培养时间以确保实验重复性);
菌落形态:在 RCA 平板上,48 小时厌氧培养后形成直径 0.5-1mm 的小菌落,圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色至淡黄色(不透明),菌落质地坚韧(挑取时不易破碎),无溶血现象(区别于厌氧致病性梭菌);在 BHI 厌氧琼脂上,菌落形态相似但生长略快(72 小时菌落直径达 1-1.5mm),可通过 “小而坚韧、淡黄色” 的菌落特征快速区分于其他肠道厌氧菌(如双歧杆菌、乳杆菌)。
生化与代谢特性:生化反应具有厌氧菌特异性,是肠道厌氧菌鉴定的核心参照:不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等常见糖类(与多数肠道需氧菌差异显著),可分解酪氨酸产生黑色素(在含酪氨酸的培养基上菌落周围形成黑色沉淀,核心鉴别特征),能降解胆汁酸(将初级胆汁酸转化为次级胆汁酸,参与肠道脂质代谢);触酶试验阴性、氧化酶试验阴性(严格厌氧菌共性),吲哚试验阴性,不产生硫化氢,不分解尿素;核心代谢优势在于药物转化能力:能通过还原、去甲基等反应转化多种临床药物(如地西泮、氟西汀、中药生物碱),同时对部分抗生素(如克林霉素、甲硝唑)具有天然耐药性(MIC 值稳定),是研究肠道菌群与药物相互作用、抗生素耐药机制的关键模型菌株。
未开封状态:产品主要以冻干粉(真空密封包装,含 10^6-10^7 CFU / 支活菌,含厌氧菌专用保护剂如半胱氨酸) 或厌氧甘油菌悬液(含 20% 甘油 + 0.05% 半胱氨酸,10^5 CFU/mL,-80℃专用) 形式供应:
冻干粉:未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存,长期储存(超过 1 年)建议放入 - 80℃冰箱,严禁反复冻融(反复冻融会使活菌率下降 80% 以上,厌氧菌对温度波动更敏感);保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 3 年(专用保护剂可维持菌体厌氧状态,避免氧化损伤);
甘油菌悬液:未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存,不可室温或冷藏放置(室温暴露 10 分钟即可导致菌体大量死亡),保质期 2 年;解冻时需在厌氧手套箱内进行,或快速解冻后立即转移至厌氧环境,避免接触空气。
复苏后状态:复苏后的菌液(BHI 厌氧肉汤培养)需在厌氧环境(厌氧罐或手套箱)中 4℃冷藏保存,建议 3-5 天内使用完毕(厌氧菌代谢缓慢但对氧气敏感,冷藏无法完全阻断氧化损伤);复苏后的斜面培养物(RCA 斜面)需在厌氧环境中 4℃冷藏保存,建议 1-2 周内传代一次,传代时需使用新鲜厌氧培养基(添加足量维生素 K₁与血红素),避免营养不足导致菌体老化;使用前需通过涂片镜检(确认菌体形态正常、无杂菌)及厌氧培养验证(接种后 48 小时菌落生长正常),确保菌株符合实验要求。
复苏操作:
冻干粉复苏:全程在厌氧手套箱内操作(或使用厌氧操作管),向冻干粉中加入 1mL 无菌厌氧 BHI 肉汤(含 0.05% 半胱氨酸),轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解(避免产生气泡带入空气),转移至无菌厌氧试管中,37℃厌氧培养箱(85% N₂、10% H₂、5% CO₂)培养 48-72 小时;待菌液轻度浑浊(OD600 值约 0.2-0.3,厌氧菌浓度较低)、镜检可见典型细长杆菌时,即可用于实验;
甘油菌复苏:在厌氧手套箱内取出甘油菌,用无菌枪头吸取 100μL 菌液接种至含 5mL 厌氧 BHI 肉汤的试管中,37℃厌氧培养 48-72 小时,待菌液浑浊后使用,剩余甘油菌需在厌氧环境中丢弃,不可暴露于空气。
传代培养:在厌氧手套箱内,用无菌接种环蘸取少量复苏菌液,在 RCA 平板上分区划线(确保单菌落分离,厌氧菌菌落小需仔细观察),37℃厌氧培养 48-72 小时;待平板形成单菌落后,挑取形态典型(圆形、淡黄色、坚韧)的单菌落,可直接用于实验,或转接至 RCA 斜面,37℃厌氧培养 72 小时后,在厌氧环境中 4℃冷藏保存;传代次数严格控制在 3 代以内(厌氧菌长期传代易丢失代谢特性),每次传代后需通过酪氨酸降解试验验证菌株特性(确保仍能产生黑色素)。
应用操作:
临床厌氧菌鉴定:作为阳性对照,验证厌氧菌鉴定系统(如 VITEK 2 ANC 卡、 MALDI-TOF MS 厌氧菌数据库)对迟缓艾格氏菌的鉴定准确性,辅助区分肠道内其他厌氧菌(如梭杆菌、真杆菌),避免因鉴定失误导致的肠道微生态研究偏差;
肠道微生态研究:用于探索肠道厌氧菌与宿主的互作机制,如研究其降解胆汁酸、转化药物的功能对宿主脂质代谢、药物疗效的影响,或构建厌氧菌共培养体系(与双歧杆菌、乳杆菌共培养),分析菌群间的竞争与协同关系;
抗厌氧菌药物药敏测试:依据 CLSI 厌氧菌药敏标准,用于验证克林霉素、甲硝唑、万古霉素等抗厌氧菌药物的敏感性测试结果,确定该菌株对不同药物的 MIC 值(如对甲硝唑 MIC≥8μg/mL,对万古霉素敏感),为临床抗厌氧菌感染用药提供参考;
药物代谢研究:作为药物肠道代谢的标准菌株,用于评估药物(如中药有效成分、抗生素)在肠道内被厌氧菌转化的效率与产物,预测药物口服后的生物利用度与潜在毒副作用,为药物研发提供肠道微生态层面的支持。


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