抗菌药物敏感性试验（Antimicrobial Susceptibility Testing，AST）是临床微生物实验室的核心工作之一。为确保药敏试验结果的准确性和可比性，国际临床和实验室标准化协会（CLSI）以及我国相关标准均要求使用经过认证的标准菌株进行质量控制。ATCC（American Type Culture Collection，美国典型培养物保藏中心）标准菌株是全球药敏试验质控的金标准。
一、药敏试验质控菌株总览
根据CLSI M100文件及我国《临床微生物学检验标准操作规程》，常用药敏试验质控菌株如下：
| ATCC编号 | 菌株名称 | 主要用途 | 方法学 |
|---|---|---|---|
| ATCC 25923 | 金黄色葡萄球菌 | K-B纸片法药敏质控（敏感株） | 纸片扩散法 |
| ATCC 29213 | 金黄色葡萄球菌 | 稀释法药敏质控（产β-内酰胺酶） | 肉汤稀释法/琼脂稀释法 |
| ATCC 25922 | 大肠埃希菌 | K-B法/MIC法药敏质控（敏感株） | 纸片扩散法/稀释法 |
| ATCC 35218 | 大肠埃希菌 | β-内酰胺酶抑制剂复合药物敏感试验 | 纸片扩散法 |
| ATCC 27853 | 铜绿假单胞菌 | 非发酵菌药敏质控 | 纸片扩散法/稀释法 |
| ATCC 29212 | 粪肠球菌 | 肠球菌属药敏质控（敏感株） | 稀释法 |
| ATCC 51299 | 粪肠球菌 | 高耐氨基糖苷类纸片质控 | 纸片扩散法 |
| ATCC 700603 | 肺炎克雷伯菌 | ESBL试验必须使用株 | 纸片扩散法/稀释法 |
| ATCC 49247 | 流感嗜血杆菌 | 流感嗜血杆菌药敏质控 | 纸片扩散法（HTM培养基） |
| ATCC 49619 | 肺炎链球菌 | 肺炎链球菌药敏质控 | 纸片扩散法/稀释法 |
二、K-B纸片法质控要点
K-B纸片扩散法（Kirby-Bauer法）是最常用的药敏试验方法之一。以ATCC 25923（金黄色葡萄球菌）和ATCC 25922（大肠埃希菌）为例，质控时需注意以下关键参数：
培养基要求：使用Mueller-Hinton（MH）琼脂，pH 7.2～7.4，厚度4mm±0.5mm。对于流感嗜血杆菌等苛养菌，需使用HTM（Haemophilus Test Medium）培养基。
菌液制备：采用直接菌落悬液法，将过夜培养的纯菌落悬浮于无菌生理盐水中，调节浊度至0.5麦氏比浊标准（约1～2×10⁸ CFU/mL）。
培养条件：35±2°C培养16～18小时（肺炎链球菌需5% CO₂环境，培养20～24小时）。
质控范围：每种抗菌药物对每种质控菌株都有明确的抑菌圈直径允许范围。例如，ATCC 25923对苯唑西林的抑菌圈应在17～21mm范围内。
三、稀释法MIC质控要点
稀释法（肉汤稀释法和琼脂稀释法）用于测定最低抑菌浓度（MIC）。ATCC 29213（金黄色葡萄球菌）是稀释法最常用的质控菌株，因其产β-内酰胺酶，对青霉素类药物的MIC值具有特征性，可有效验证试验系统的准确性。
稀释法质控的关键在于：接种菌液浓度必须精确调整至5×10⁵ CFU/mL（工作浓度），培养基中抗菌药物的浓度梯度应按对数稀释（通常为2倍稀释系列），培养条件与K-B法一致。
四、特殊试验的质控菌株
| 试验类型 | 质控菌株 | 质控目的 |
|---|---|---|
| ESBL确证试验 | ATCC 700603（肺炎克雷伯菌） | 产SHV-18型ESBL，阳性对照 |
| β-内酰胺酶抑制剂复合药试验 | ATCC 35218（大肠埃希菌） | 产TEM-1 β-内酰胺酶，验证克拉维酸增效作用 |
| 高水平氨基糖苷类耐药（HLAR） | ATCC 51299（粪肠球菌） | 含aac(6')-aph(2")基因，庆大霉素纸片直径6～10mm |
五、标准菌株的保存与复苏
标准菌株的质量直接影响药敏试验质控的可靠性。根据CLSI和ISO 20776-1标准要求：
保存条件：工作菌株应在-60°C以下冷冻保存或冻干保存。从ATCC标准菌株收到的冻干菌粉应按说明书规定的温度和培养基进行复苏。
传代限制：工作菌株从原始菌种开始的传代次数不得超过5代。超过传代限制的菌株可能出现自发突变或抗性漂移，应予以废弃。
纯度鉴定：每次使用前应进行平板划线，观察菌落形态是否一致，必要时进行革兰染色镜检和生化鉴定，确保菌株纯度。
质控验证：新批号工作菌株启用前，应与已知质控范围的参考菌株进行平行试验，确认药敏结果在CLSI规定的质控范围内。
六、常见问题与解决方案
药敏质控中常见的问题包括：抑菌圈偏大或偏小（超出CLSI允许范围）、质控菌株生长不良、以及抑菌圈边缘模糊等。这些问题通常与培养基pH值偏差、琼脂厚度不均、菌液浓度不准确或培养温度波动有关。建议实验室建立完善的质控记录体系，当连续出现超出范围的结果时，应及时排查原因并采取纠正措施。
杭州沐昀科技提供全系列ATCC标准菌株，涵盖药敏质控、消毒检测、食品安全检验等领域，所有菌株均附带完整的溯源证书和培养说明。
相关产品推荐：
• ATCC药敏质控菌株系列 — 包括ATCC 25923、25922、29213、27853等CLSI推荐菌株
• 微生物检测产品 — 培养基、药敏纸片、质控试剂等配套产品
• 实验室耗材 — 培养皿、接种环、比浊管等
免责声明：本文所述产品仅用于科研和工业灭菌验证用途，不用于临床诊断和治疗。文中涉及的菌株、D值、灭菌参数等技术数据来源于公开文献和产品说明书，仅供参考。具体产品选型和使用请以产品说明书和最新法规要求为准。杭州沐昀科技有限公司不对因使用本文信息而产生的任何损失承担责任。
客服1