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ATCC11775大肠杆菌Escherichia coli WDCM 00090

一、产品名称官方名称为 ATCC 11775 大肠杆菌,拉丁学名为Escherichia coli,同时拥有世界微生物数据中心(WDCM)编号 WDCM 00090,由美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏。作为大肠杆菌属中兼具典型性与权威性的标准菌株,其遗传背景清晰、表型稳定,核心用于微生物检测方法验证、食品与环境安全质控,同时在临床微生物鉴定

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一、产品名称
官方名称为 ATCC 11775 大肠杆菌,拉丁学名Escherichia coli,同时拥有世界微生物数据中心(WDCM)编号 WDCM 00090,由美国典型培养物保藏中心(ATCC)保藏。作为大肠杆菌属中兼具典型性与权威性的标准菌株,其遗传背景清晰、表型稳定,核心用于微生物检测方法验证、食品与环境安全质控,同时在临床微生物鉴定及分子生物学基础实验中广泛应用,是全球实验室公认的可靠对照菌株。
二、产品特点
  1. 生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无致病性,属于人类肠道正常菌群(非致病菌株),常规实验室规范操作(超净台接种、无菌耗材使用)下,对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康人类肠道样本,其生物学特性与肠道内非致病大肠杆菌高度吻合,能精准模拟自然状态下的菌群生理代谢特征,是连接基础微生物研究与实际应用(如食品污染检测)的关键桥梁菌株。

  1. 形态与培养特性:属于革兰氏阴性短杆菌,具有肠杆菌科典型形态与易培养特性:

  • 显微镜形态:菌体呈短杆状,直径 0.5-1.0μm,长度 1.0-2.0μm,常单个或成对排列,无芽孢,多数菌株具有周生鞭毛(具备运动能力,经鞭毛染色可清晰观察),革兰氏染色呈红色(符合革兰氏阴性菌典型特征);

  • 培养要求:对营养需求低,在普通营养琼脂(NA)、胰酪大豆琼脂(TSA)、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂(EMB)等培养基中均可快速生长;兼性厌氧,最适生长温度 37℃(适配人体生理环境),可耐受 10-45℃宽温度范围,生长速度快,37℃培养 18-24 小时即可形成明显菌落;

  • 菌落形态:在 TSA 平板上,形成直径 2-3mm 的菌落,圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、呈乳白色(不透明);在麦康凯琼脂(选择性培养基)上,因能发酵乳糖产酸,菌落呈粉红色(可快速区分于不发酵乳糖的沙门氏菌、志贺氏菌等致病菌);在 EMB 琼脂上,菌落呈紫黑色且带有金属光泽(大肠杆菌特征性菌落形态,进一步提升鉴别准确性),是食品、水质检测中快速识别大肠杆菌的重要依据。

  1. 生化与生理特性:生化反应稳定且具有物种代表性,是肠杆菌科菌种鉴别的核心参照:能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等多种糖类,且发酵过程中产酸产气(“发酵产酸产气” 是大肠杆菌标志性特征);触酶试验阳性(区别于链球菌等革兰氏阳性球菌)、氧化酶试验阴性(肠杆菌科共性特征);吲哚试验阳性(可分解色氨酸产生吲哚)、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性(即 “IMViC 试验” 结果为 “++--”,是大肠杆菌经典生化鉴别标志);不产生硫化氢,不分解尿素,这些稳定的生化特性确保其在微生物鉴定实验中可作为可靠的标准对照菌株。

三、储存环境
  1. 未开封状态:产品主要以冻干粉(真空密封包装,含 10^7-10^8 CFU / 支活菌)甘油菌悬液(含 20% 甘油保护剂,-80℃专用保存型) 形式供应:

  • 冻干粉:未开封时需置于 - 20℃以下冷冻环境保存,若需长期储存(超过 6 个月),建议放入 - 80℃冰箱,可最大程度维持菌株活性;严禁反复冻融,反复冻融会导致活菌率下降 50% 以上,破坏菌株生化特性稳定性,冻干粉保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 3 年;

  • 甘油菌悬液:未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存,不可室温放置或冷藏,保质期 1-2 年;解冻后需一次性使用,剩余菌液不可再次冷冻,避免菌体活力大幅衰减。

  1. 复苏后状态:复苏后的菌液(TSB 肉汤或 LB 肉汤培养)需在 2-8℃冷藏保存,建议 3-5 天内使用完毕(大肠杆菌代谢活跃,长期冷藏易导致菌体老化或滋生污染);复苏后的斜面培养物(TSA 斜面)需 2-8℃冷藏保存,建议 1-2 周内进行一次传代培养,传代时需使用新鲜培养基,确保菌株形态与生化特性稳定;使用前可通过涂片镜检确认菌体形态正常(无肿胀、畸形或裂解),保障实验可靠性。

四、使用方法
  1. 复苏操作

  • 冻干粉复苏:无菌环境下(超净台内),向冻干粉包装中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤(TSB)或 LB 肉汤,轻轻振荡使粉末完全溶解,将菌液转移至无菌试管,置于 37℃培养箱振荡培养(180-200rpm)12-16 小时(振荡培养可促进菌体均匀生长,缩短复苏时间);待菌液呈均匀浑浊状(OD600 值约 0.6-0.8,处于对数生长期,菌体活性最佳)、镜检可见典型短杆菌时,即可用于后续实验;

  • 甘油菌复苏:从 - 80℃冰箱取出甘油菌后,立即用无菌枪头吸取 100μL 菌液,接种至含 5mL TSB/LB 肉汤的无菌试管中,37℃振荡培养 12-16 小时,待菌液浑浊后即可使用;剩余甘油菌需直接丢弃,不可再次冷冻。

  1. 传代培养:在超净台内,用无菌接种环蘸取少量复苏后的菌液,在 TSA 平板上采用分区划线法接种(便于形成单菌落,利于纯化菌株),37℃培养 18-24 小时;待平板上形成单菌落后,挑取形态典型(圆形、乳白色、光滑)的单菌落,可直接用于实验,或转接至 TSA 斜面培养基,37℃培养 24 小时后,置于 2-8℃冷藏保存;为避免菌株遗传特性漂移(如丢失部分生化功能),斜面菌种建议传代次数不超过 5 代。

  1. 应用操作

  • 食品与环境安全检测:作为核心质控菌株,验证食品(如乳制品、肉制品、饮用水)、环境样品(如土壤、污水)中大肠杆菌及大肠菌群检测方法的准确性,包括平板计数法、快速检测试剂盒、胶体金试纸条等,确保检测结果可靠,保障食品与环境安全;

  • 临床微生物鉴定:作为阳性对照,验证生化鉴定试剂盒(如 API 20E)、微生物质谱检测系统(MALDI-TOF MS)对肠杆菌科细菌的鉴定能力,辅助区分大肠杆菌与其他肠道致病菌(如沙门氏菌、克雷伯菌),提升临床诊断准确性;

  • 基础科研领域:作为分子生物学实验的模式菌株,用于基因克隆、重组质粒扩增、蛋白质表达(如利用该菌株表达外源蛋白)及微生物代谢途径解析(如研究碳源代谢关键基因功能);

  • 药敏测试质控:依据 CLSI(美国临床和实验室标准协会)标准,用于验证抗菌药物(如头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类)对非致病大肠杆菌的敏感性测试结果,校准药敏检测设备(如全自动药敏分析仪),为临床合理用药提供基础参照。



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