生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无致病性，属于人类肠道正常菌群（非致病菌株），常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康人类粪便样本，其生物学特性与肠道内天然存在的大肠杆菌高度一致，能精准模拟粪源大肠杆菌的生理代谢特征，是判断食品、水质是否受粪便污染的关键参照菌株。
形态与培养特性：属于革兰氏阴性短杆菌，具有肠杆菌科典型形态与易培养优势：
显微镜形态：菌体呈短杆状，直径 0.5-1.0μm，长度 1.0-2.0μm，常单个或成对排列，无芽孢，多数菌株具有周生鞭毛（具备运动能力，鞭毛染色后可清晰观察），革兰氏染色呈红色（符合革兰氏阴性菌典型特征）；
培养要求：对营养需求低，在普通营养琼脂（NA）、胰酪大豆琼脂（TSA）、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂（EMB）及乳糖发酵培养基中均可快速生长；兼性厌氧，最适生长温度 37℃（适配人体肠道环境），可耐受 10-45℃宽温度范围，且能在 44.5℃选择性温度下生长（粪大肠菌群特征性培养温度，可区分非粪源大肠杆菌），生长速度快，37℃培养 18-24 小时即可形成明显菌落；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成直径 2-3mm 的菌落，圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、呈乳白色（不透明）；在麦康凯琼脂上，因发酵乳糖产酸，菌落呈粉红色（可快速区分于不发酵乳糖的肠道致病菌）；在 EMB 琼脂上，菌落呈紫黑色且带有金属光泽（大肠杆菌标志性菌落形态），在乳糖发酵培养基中培养可产酸产气（培养基浑浊且倒置小管内出现气泡），是粪大肠菌群检测的核心判定依据。
生化与生理特性：生化反应稳定且具有粪源大肠杆菌代表性，是肠道菌群鉴别的重要参照：能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等糖类产酸产气（“产酸产气” 是大肠杆菌核心生化特征）；触酶试验阳性（区别于链球菌等革兰氏阳性菌）、氧化酶试验阴性（肠杆菌科共性）；吲哚试验阳性（可分解色氨酸产生吲哚）、甲基红试验阳性、V-P 试验阴性、柠檬酸盐利用试验阴性（IMViC 试验结果为 “++--”，大肠杆菌经典鉴别标志）；能在 44.5℃下发酵乳糖产酸产气（粪大肠菌群关键生化指标），不产生硫化氢，不分解尿素，这些稳定的生化特性确保其在粪源微生物检测中可作为可靠标准对照。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^7-10^8 CFU / 支活菌） 或甘油菌悬液（含 20% 甘油保护剂，-80℃专用型） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 6 个月）建议放入 - 80℃冰箱，可最大程度维持菌株活性；严禁反复冻融，反复冻融会导致活菌率下降 50% 以上，破坏菌株 44.5℃发酵等关键特性，冻干粉保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 3 年；
甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温放置或冷藏，保质期 1-2 年；解冻后需一次性使用，剩余菌液不可再次冷冻，避免菌体活力大幅衰减。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤或 LB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 3-5 天内使用完毕（大肠杆菌代谢活跃，长期冷藏易导致菌体老化或污染）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 1-2 周内传代一次，传代时使用新鲜培养基，确保菌株形态、生化特性（尤其是 44.5℃发酵能力）稳定；使用前可通过涂片镜检及乳糖发酵试验确认菌体形态正常、生化功能完好，保障实验可靠性。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤（TSB）或 LB 肉汤，轻轻振荡使粉末完全溶解，转移至无菌试管，37℃培养箱振荡培养（180-200rpm）12-16 小时（振荡培养促进菌体均匀生长）；待菌液呈均匀浑浊状（OD600 值约 0.6-0.8，处于对数生长期，活性最佳）、镜检可见典型短杆菌时，即可用于实验；
甘油菌复苏：从 - 80℃取出甘油菌后，立即用无菌枪头吸取 100μL 菌液，接种至含 5mL TSB/LB 肉汤的无菌试管中，37℃振荡培养 12-16 小时，待菌液浑浊后使用，剩余甘油菌需丢弃，不可再次冷冻。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（便于形成单菌落纯化菌株），37℃培养 18-24 小时；待平板形成单菌落后，挑取形态典型（圆形、乳白色、光滑）的单菌落，可直接用于实验，或转接至 TSA 斜面，37℃培养 24 小时后 2-8℃冷藏保存；为避免菌株遗传特性漂移（如丢失 44.5℃发酵能力），斜面菌种传代次数不超过 5 代。
应用操作：
食品与水质安全检测：作为粪大肠菌群检测的核心质控菌株，验证饮用水、乳制品、肉制品、果蔬等样品中粪大肠菌群检测方法（如多管发酵法、平板计数法、快速检测试纸条）的准确性，通过其在 44.5℃下的乳糖发酵特性，判定检测方法对粪源污染的识别能力，保障食品与水质安全；
临床微生物鉴定：作为阳性对照，验证生化鉴定试剂盒（如 API 20E）、微生物质谱检测系统（MALDI-TOF MS）对肠杆菌科细菌的鉴定能力，辅助区分大肠杆菌与沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌，提升临床诊断准确性；
基础科研领域：作为分子生物学实验模式菌株，用于基因克隆、重组质粒扩增及肠道微生物代谢研究（如探索粪源大肠杆菌对肠道碳源的利用机制）；
教学与方法验证：在微生物实验教学中，用于演示革兰氏染色、菌落形态观察及生化反应操作，同时可用于实验室新检测方法的验证（如评估新型快速检测试剂的特异性与灵敏度）。
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