生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无强致病性,是细菌性阴道病的主要致病菌之一,常规超净台操作即可,器具使用后需高压灭菌。菌株分离自临床细菌性阴道病患者阴道分泌物样本,生物学特性与临床分离株高度一致,可模拟自然感染状态下的生殖道定植与致病表型。
形态与培养特性:革兰氏染色不定(多为革兰氏阴性短杆菌,陈旧培养物易呈革兰氏阳性),具生殖道菌典型特征:
显微镜形态:菌体呈短杆状或球杆状(0.5-0.7μm×1.0-2.0μm),常单个或成对排列,无芽孢、无鞭毛(非运动型),新鲜培养物革兰氏染色呈均匀淡红色,陈旧培养物易脱色;
培养要求:兼性厌氧,最适培养基为阴道加德纳菌选择性琼脂(如 Columbia CNA 琼脂添加人血)、巧克力琼脂,最适温度 35-37℃,需 5%-10% CO₂环境促进生长,生长速度中等(24-48 小时形成菌落);
菌落形态:人血琼脂上呈圆形、表面光滑、边缘整齐的灰白色半透明菌落(直径 0.5-1mm),具 “卫星现象”(靠近金黄色葡萄球菌菌落时生长更旺盛),β- 溶血弱阳性(溶血环窄且淡,核心鉴别特征)。
生化与致病特性:生化反应具物种特异性:氧化酶阴性、触酶阴性,能发酵葡萄糖、麦芽糖产酸不产气,不发酵乳糖、蔗糖;核心致病特性为产生黏附素与胺类物质(如腐胺、尸胺),黏附阴道上皮细胞形成生物膜,胺类物质引发阴道异味与 pH 升高(BV 典型症状);药敏表型稳定,经 CLSI 标定,对甲硝唑、克林霉素敏感(甲硝唑 MIC 0.5-2μg/mL),对青霉素类药物中度敏感,是临床 BV 用药质控的可靠参照。
未开封状态:以冻干粉(真空密封包装,含 10^6-10^7 CFU / 支,含生殖道菌专用保护剂)或标准化甘油菌悬液(20% 甘油,10^5 CFU/mL,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期储存(>6 个月)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 60% 以上,破坏溶血与生化特性),保质期 3 年;
甘油菌悬液:直接 - 80℃保存,不可室温放置(室温暴露 1 小时致活力下降 40%),保质期 2 年,解冻后需一次性使用,剩余菌液灭菌后丢弃。
复苏后状态:复苏菌液(巧克力琼脂肉汤培养)需 2-8℃冷藏,5 天内使用完毕;斜面培养物(巧克力琼脂斜面)需 2-8℃冷藏,2 周内传代一次,传代时需使用含 5% CO₂环境,使用前需镜检确认菌体形态正常,并通过人血琼脂验证 “卫星现象” 与弱溶血特征。
复苏操作:超净台内,冻干粉加 1mL 无菌巧克力琼脂肉汤溶解,转移至无菌试管,37℃ 5% CO₂培养箱培养 24-48 小时;待菌液浑浊、镜检见典型短杆菌,且接种人血琼脂出现 “卫星现象” 时,即可使用。
传代培养:超净台内,挑取人血琼脂单菌落,划线接种新鲜人血琼脂平板,37℃ 5% CO₂培养 24-48 小时;斜面保存后 2-8℃冷藏,传代次数≤3 代(避免丢失 “卫星现象” 与溶血特性)。
应用操作:
临床质控:验证细菌性阴道病诊断系统(如阴道微生态分析仪、生化试剂盒)准确性;
AST 测试:校准甲硝唑、克林霉素等药物 MIC 值,指导临床 BV 治疗用药;
微生态研究:用于女性生殖道菌群互作实验(如与乳杆菌共培养),分析菌群平衡机制;
教学演示:用于微生物实验中 “生殖道致病菌鉴别” 教学,演示 “卫星现象” 与革兰氏染色不定特征。


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