ATCC 49131 产酸克雷伯菌（Klebsiella oxytoca）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具医院感染倾向性，主要定植于医院环境（如 ICU 病床、医疗器械表面）及住院患者肠道，尤其易感染术后、化疗后或长期使用广谱抗生素的免疫缺陷人群，部分菌株可引发难治性抗生素相关性出血性肠炎，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床腹腔感染患者腹腔积液样本，生物学特性与医院获得性产酸克雷伯菌分离株高度一致，其耐受高浓度抗生素、形成致密生物膜的能力显著，可模拟医院环境中 “环境定植 - 器械污染 - 患者感染 - 耐药传播” 的典型过程，是研究医院获得性产酸克雷伯菌感染机制的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具产酸特性与耐药菌株特有的培养适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.6-1.2μm×1.2-2.5μm），较 ATCC43086 略粗，单个、成对或短链排列，无芽孢，周生鞭毛明显（动力试验阳性，区别于部分鞭毛不明显的产酸克雷伯菌菌株），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，40-60 秒内不易脱色，适配复杂临床样本染色操作），荚膜染色可见较厚荚膜（荚膜厚度约 0.3-0.6μm，厚于 ATCC43086，是增强耐药性与抗吞噬能力的关键结构）；
培养要求：兼性厌氧，耐受低氧与高二氧化碳环境（适配医院 ICU 密闭环境），最适培养基为麦康凯琼脂（含低浓度抗生素筛选）、中国蓝琼脂及营养琼脂，最适温度 35-37℃，生长速度较快（16-22 小时形成清晰菌落，适配医院感染快速检测需求），在含 8μg/mL 氨苄西林的选择性培养基上仍可生长（体现天然耐药特性），核心特征为强产酸能力（在麦康凯琼脂上形成深紫红色菌落，产酸强度高于 ATCC43086，因发酵乳糖、蔗糖的速率更快，指示剂变色更明显，易与其他肠杆菌科菌株区分）；
菌落形态：麦康凯琼脂上呈圆形、表面光滑黏稠且边缘略不规则的深紫红色菌落（直径 1.2-2.2mm），质地坚韧，挑取时拉丝长度可达 3-5cm（因荚膜多糖与生物膜基质分泌量高），菌落表面具强光泽；在中国蓝琼脂上呈蓝色、中心略深的菌落，无溶血现象（接种绵羊血琼脂无溶血环，区别于医院常见的溶血性葡萄球菌）；菌落虽与 ATCC43086 均为产酸型，但可通过菌落颜色深度、拉丝长度及耐药培养基生长能力初步鉴别。
生化与药敏特性：生化反应具物种特异性且含耐药菌株标识：氧化酶阴性、触酶阳性，发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖产酸产气（发酵麦芽糖能力强于 ATCC43086，是重要生化鉴别点），不发酵肌醇与山梨醇，VP 试验强阳性，甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（生化结果稳定，可通过麦芽糖发酵强度快速区分于 ATCC43086）；核心优势在于医院感染适配的耐药表型：除对氨苄西林天然耐药（MIC≥64μg/mL，耐药浓度高于 ATCC43086）外，携带超广谱 β- 内酰胺酶（ESBLs，CTX-M 型），对头孢噻肟、头孢他啶等第三代头孢菌素耐药（头孢噻肟 MIC 16-32μg/mL），仅对碳青霉烯类（美罗培南）、含 β- 内酰胺酶抑制剂的复方制剂（哌拉西林 / 他唑巴坦）敏感（美罗培南 MIC 0.12-0.25μg/mL），耐药谱与医院获得性产酸克雷伯菌流行株高度一致，是抗耐药 AST 方法建立与药敏试剂校准的金标准参照。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，含荚膜保护剂与耐药基因稳定剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存，长期（>1 年）必须置于 - 80℃储存（耐药基因对温度敏感，低温可避免基因突变），严禁反复冻融（活菌率下降 60% 以上，易导致 ESBLs 基因丢失或产酶能力下降），保质期 4 年（因耐药菌株表型稳定性略低于敏感株，保质期短于 ATCC43086）；
甘油菌：直接 - 80℃保存，避免在 - 20℃短期存放（易引发菌体破裂与耐药表型漂移），室温暴露 20 分钟致活力下降 45%，保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止耐药基因交叉污染实验环境）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤培养，可添加 1μg/mL 头孢噻肟诱导耐药基因表达）2-8℃冷藏 5 天内使用（耐药菌株代谢活跃，长期保存易导致耐药性波动）；斜面培养物（营养琼脂斜面，含 2μg/mL 头孢噻肟）2-8℃冷藏 3 周内传代，传代时需避免反复划线（防止菌株纯度下降），使用前需镜检确认短杆状形态，并通过头孢噻肟药敏试验与 ESBLs 确证试验（双纸片协同试验）验证耐药特性（确保耐药表型未漂移）。
四、使用方法
复苏操作：生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含 1μg/mL 头孢噻肟的营养肉汤溶解，37℃恒温培养箱振荡培养（150rpm）16-22 小时；待菌液浑浊（OD600≈0.8）、镜检见典型短杆菌，且接种含头孢噻肟的麦康凯琼脂形成深紫红色菌落时，通过 ESBLs 确证试验确认耐药特性后使用（复苏过程中添加低浓度抗生素可维持耐药基因表达，复苏成功率≥95%）。
传代培养：挑取含药麦康凯琼脂上的深紫红色单菌落，划线接种新鲜含药麦康凯琼脂平板（或营养琼脂平板，添加 2μg/mL 头孢噻肟），37℃培养 16-22 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤4 代（耐药表型易因传代次数过多退化，传代次数少于 ATCC43086），每次传代后需通过头孢他啶药敏试验与麦芽糖发酵试验双重验证典型特性。
应用操作：
医院感染质控：用于医院检验科腹腔积液、切口分泌物、ICU 患者痰液等复杂样本鉴定系统（质谱耐药数据库、耐药基因 PCR 试剂盒）的性能验证，确保医院获得性耐药产酸克雷伯菌不被漏检或误判为敏感株；
抗耐药 AST 校准：校准抗耐药 AST 试剂（如碳青霉烯类药敏纸片、ESBLs 检测板）的 MIC 值，制定医院获得性产酸克雷伯菌感染用药方案（如避免使用第三代头孢菌素，优先选择碳青霉烯类或复方制剂）；
耐药机制研究：用于 ESBLs 基因（CTX-M）表达调控、生物膜与耐药性协同机制研究，及新型抗耐药药物（如 β- 内酰胺酶抑制剂增强剂）筛选，为医院感染耐药防控提供理论依据；
医院感染培训：作为医院感染防控培训菌株，用于医务人员 “耐药菌环境定植检测”“医疗器械消毒效果验证” 等实操培训，及 “社区获得性与医院获得性产酸克雷伯菌表型差异” 对比教学，提升医院感染防控意识。
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