ATCC 33495 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）产品简介
一、产品名称
二、产品特点
生物安全与来源：生物安全等级为 2 级（BSL-2），具高毒力侵袭性感染倾向性，区别于普通社区获得性菌株（如 ATCC27736），该菌株携带高毒力相关基因（如 rmpA、aerobactin 合成基因），可突破宿主免疫屏障引发远处器官感染，尤其易导致健康人群发生肝脓肿、脓毒症及眼内炎等严重疾病，操作需在生物安全柜内进行，器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自临床肝脓肿患者脓液样本，生物学特性与高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）临床分离株高度一致，其产生荚膜多糖量高、铁载体获取能力强，可模拟 “局部感染 - 血行播散 - 多器官侵袭” 的典型高毒力株感染过程，是研究 hvKP 毒力机制与侵袭路径的理想模型。
形态与培养特性：革兰氏阴性短杆菌，具高毒力株特有的厚荚膜形态与培养适配性：
显微镜形态：菌体呈短杆状（0.6-1.1μm×1.8-2.5μm），大小略大于 ATCC27736，单个或成对排列（呈 “双球状” 聚集的比例高达 40%-50%，高于普通社区株，适配高毒力株密集定植特征），无芽孢，无鞭毛（动力试验 100% 阴性，与其他肺炎克雷伯菌一致），革兰氏染色呈均匀深红色（染色稳定性高，30-60 秒内不易脱色，适配脓液、血液等侵袭性感染样本染色操作），荚膜染色可见极厚荚膜（荚膜厚度约 1.0-1.5μm，显著厚于 ATCC27736 与 ATCC23357，荚膜多糖含 rmpA 基因调控的高表达产物，是增强抗吞噬与侵袭能力的核心结构）；
培养要求：兼性厌氧，对营养需求较高（需丰富铁离子环境，适配高毒力株铁载体依赖特性），最适培养基为血琼脂、麦康凯琼脂及营养肉汤（添加 0.1% 血红素），最适温度 35-37℃（温度波动 ±1℃时，生长速率变化≤8%，适配临床实验室精准培养条件），生长速度较快（16-22 小时形成清晰菌落，适配侵袭性感染快速检测需求），核心特征为高荚膜相关培养表型（在血琼脂上形成黏液型菌落，菌落边缘模糊呈 “拉丝状” 扩散，区别于 ATCC27736 的光滑型菌落，是高毒力株肉眼鉴别关键特征）；
菌落形态：血琼脂上呈圆形、表面黏稠多黏液且边缘不规则的灰白色菌落（直径 1.5-2.2mm，大于 ATCC27736），质地极软（因荚膜多糖分泌量极高，挑取时拉丝长度可达 5-8cm，显著长于普通菌株，是 hvKP 标志性鉴别特征），菌落表面具弱光泽（因大量荚膜多糖覆盖，光泽度低于普通社区株）；麦康凯琼脂上呈圆形、表面黏液状的粉红色菌落，边缘因黏液扩散呈 “毛玻璃样”，无溶血现象（虽无溶血，但高荚膜特性仍可与溶血性致病菌区分）；菌落易与普通肺炎克雷伯菌混淆，需通过黏液型菌落形态、拉丝长度及毒力基因检测进一步确认高毒力属性。
生化与药敏特性：生化反应具高毒力株特有标识，药敏谱符合 hvKP 临床感染治疗需求：
生化特性：氧化酶阴性、触酶阳性（阳性反应时间稳定在 12-25 秒，无延迟反应），发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖产酸产气（发酵麦芽糖能力强于 ATCC27736，是高毒力株与普通社区株的生化鉴别点之一），发酵山梨醇阳性（48 小时内菌落周围出现明显红色晕圈，区别于 ATCC27736 的山梨醇阴性，符合 hvKP 生化特征），VP 试验强阳性（反应强度显著高于普通菌株），甲基红试验阴性，枸橼酸盐利用试验阳性（48 小时内 100% 阳性，无延迟，符合高毒力株生化稳定性特征），生化结果符合 hvKP 鉴定标准，可作为高毒力株生化鉴定卡性能验证的关键菌株；
药敏特性：核心优势在于高毒力株适配药敏谱，虽为高毒力亚型，但无多重耐药基因携带（区别于耐药高毒力株），仅对青霉素类（氨苄西林）天然耐药（MIC≥64μg/mL，耐药浓度高于 ATCC27736），对临床常用抗菌药物（头孢曲松、左氧氟沙星、哌拉西林 / 他唑巴坦、碳青霉烯类）均敏感，MIC 值高度标准化（头孢曲松 MIC 0.25-1μg/mL，美罗培南 MIC 0.12-0.25μg/mL），药敏谱与非耐药型 hvKP 临床感染治疗响应高度匹配，同时其毒力相关基因（rmpA、iucA）表达稳定，是研究高毒力株 “毒力 - 药敏” 关联及新型抗毒力药物筛选的理想模型。
三、储存环境
未开封状态：以冻干粉（真空包装，含 10^7-10^8 CFU / 支，添加荚膜保护剂与毒力基因稳定剂）或甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用）供应：
冻干粉：-20℃以下冷冻保存（可保存 1.5 年，短于 ATCC27736），长期（>1.5 年）必须置于 - 80℃±5℃储存（高毒力株荚膜多糖与毒力基因对温度敏感，低温可避免表型漂移），严禁反复冻融（冻融次数≥2 次时，活菌率下降≥60%，且荚膜厚度变异系数升至 20% 以上，毒力基因表达量降低），保质期 4 年（因高毒力株表型稳定性略低于普通社区株，保质期短于 ATCC27736）；
甘油菌：直接 - 80℃±5℃保存（不可在 - 20℃存放，否则会导致菌体破裂与毒力表型退化），室温暴露 15 分钟致活力下降 45%（暴露耐受性低于普通社区株，需严格控制操作时间），保质期 2 年，解冻后需一次性使用（不可分装，防止高毒力菌株交叉污染实验环境，尤其避免与免疫缺陷动物实验区域混用）。
复苏后状态：复苏菌液（营养肉汤，添加 0.1% 血红素促进毒力表型恢复）2-8℃冷藏 5 天内使用（5 天内荚膜厚度与毒力基因表达量波动≤10%，超过则需重新复苏）；斜面培养物（血琼脂斜面，含 0.1% 血红素）2-8℃冷藏 3 周内传代（传代间隔≥6 天时，毒力表型稳定性最佳），传代时需避免反复划线（防止黏液型菌落形态退化），使用前需通过三项关键指标验证：①镜检确认极厚荚膜形态（厚度≥1.0μm）；②山梨醇发酵试验（阳性）；③头孢曲松药敏 MIC 值（0.25-1μg/mL），确保表型未漂移，符合高毒力株要求。
四、使用方法
复苏操作：严格遵循高毒力菌株复苏流程，生物安全柜内，冻干粉加 1mL 含血红素的营养肉汤溶解，37℃±0.5℃恒温培养箱振荡培养（150rpm）16-22 小时；待菌液 OD600 值稳定在 0.8-0.9（吸光度变异系数≤5%）、镜检见含极厚荚膜的短杆状菌体，且接种血琼脂形成黏液型拉丝菌落（拉丝长度≥5cm）时，通过毒力基因 PCR（检测 rmpA、iucA 基因）确认高毒力属性后使用（复苏成功率≥95%，适配高毒力株实验操作需求）。
传代培养：挑取血琼脂上的黏液型单菌落（选择菌落中心黏液最丰富的菌体，避免挑取边缘非黏液型菌落），划线接种新鲜血琼脂平板，37℃±0.5℃培养 16-22 小时；斜面保存后 2-8℃冷藏，传代≤4 代（传代次数≥5 代时，黏液型菌落形态退化率≥30%，毒力基因表达量降至初始水平的 60% 以下），每次传代后需进行 “形态 - 生化 - 毒力” 三重验证：①革兰氏染色与荚膜染色确认厚荚膜稳定性；②山梨醇发酵试验与 VP 试验确认生化一致性；③毒力基因 PCR 与拉丝长度测定确认高毒力属性，确保菌株始终符合 hvKP 特征。
应用操作：
高毒力株感染质控：用于医院检验科侵袭性感染样本（肝脓肿脓液、眼内液、血液）鉴定系统（质谱高毒力株数据库、毒力基因检测试剂盒）的性能验证，确保 hvKP 不被漏检或误判为普通肺炎克雷伯菌，尤其适配高毒力株快速识别需求；
抗高毒力株 AST 校准：校准针对 hvKP 的 AST 试剂（如头孢曲松、碳青霉烯类药敏纸片）的 MIC 值，制定 hvKP 感染用药方案（如肝脓肿治疗优先选择敏感 β- 内酰胺类药物联合脓肿引流，避免因毒力误判导致的治疗不足）；
毒力机制研究：用于 hvKP 荚膜合成调控（rmpA 基因功能）、铁载体获取（aerobactin 作用）及血脑屏障 / 血眼屏障穿透机制研究，及新型抗毒力药物（如荚膜多糖合成抑制剂、铁载体拮抗剂）筛选，为 hvKP 感染防控提供理论依据；
诊断试剂研发：作为高毒力肺炎克雷伯菌诊断试剂（如胶体金毒力抗原试纸、荧光定量 PCR 试剂盒）的标准品，校准试剂对 hvKP 的检测敏感性与特异性，确保临床对高毒力株的精准识别与早期干预。
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