中文名称:嗜肺军团菌
拉丁学名:Legionella pneumophila
标准编号:ATCC33152、WDCM 00107
产品形式:冻干粉(含脱脂乳 - 谷氨酸复合保护剂,减少冻干过程中菌体活性损失,复苏率≥80%)
安全等级:3 级(严格致病性菌株,可引起人类军团菌病,主要通过呼吸道传播,需在生物安全三级实验室(BSL-3)或符合同等防护级别的专业实验室操作)
模式菌株:非模式菌株(是嗜肺军团菌血清型 1 型中研究最广泛的菌株,也是临床检测、疫苗研发及环境监测领域的核心参照菌株)
分类地位:隶属于军团菌科、军团菌属,为革兰氏阴性需氧菌,广泛存在于淡水环境、空调冷凝水、热水系统等人工水体中,是军团菌病的主要病原体
形态特征:菌落呈灰白色至淡蓝色,直径 1-2mm,表面光滑、湿润,边缘整齐或呈轻微锯齿状,质地黏稠,菌落隆起且半透明,在 BCYE(缓冲活性炭酵母提取物)培养基上生长后,菌落中心可出现深色斑点;菌体为革兰氏阴性,呈短杆状或丝状,大小约 0.3-0.6μm×2.0-5.0μm,常单个或短链排列,无芽孢,有极生或侧生鞭毛(具备运动能力),需用姬姆萨染色或镀银染色才能清晰观察。
生理特性:专性需氧菌,最适生长温度 35-37℃,生长 pH 范围 6.9-7.2,营养需求特殊 —— 需依赖半胱氨酸和铁离子才能生长(普通培养基无法培养,是与其他常见细菌区分的关键特征);不发酵糖类,不产生吲哚,不分解尿素,氧化酶试验阳性,触酶试验阳性;可产生内毒素,具备较强的细胞侵袭能力,能在人体肺泡巨噬细胞内寄生繁殖,逃避宿主免疫清除。
培养条件:必须使用 BCYE 培养基(添加 L - 半胱氨酸、焦磷酸铁、活性炭、酵母提取物等,pH7.0±0.2),37℃有氧培养(需通入含 5% CO₂的空气,或使用 CO₂培养箱)48-72h,培养后菌落密度可达 10⁷-10⁸CFU/mL;液体培养需选用 BCYE 液体培养基,37℃振荡培养(转速 120-150rpm)72h,期间需定期取样监测菌体生长状态,避免过度培养导致活性下降。
活化步骤:严格在 BSL-3 实验室生物安全柜内操作,无菌环境下开启安瓿管,用 1mL 无菌 BCYE 液体培养基(预热至 37℃)充分溶解菌粉,将菌液全部接种至 BCYE 固体平板,37℃、5% CO₂培养箱培养 72h 后,挑取单个典型菌落转接至 BCYE 液体培养基,37℃振荡培养 48h,即可获得高活性种子液(全程需避免菌液气溶胶产生,操作后对生物安全柜进行彻底消毒)。
保存方法:未启封冻干粉需在 - 20℃以下密封避光保存,有效期 3 年;复苏后菌种需立即分装 —— 取对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 体积比混合,快速冷冻后置于 - 80℃保存,或真空冷冻干燥后 - 20℃保存,有效期均可达 2-3 年;严禁反复冻融(单次冻融活性损失≥40%),且保存区域需单独划分,与其他低风险菌种隔离。
临床检测与诊断:作为临床微生物实验室的标准对照菌株,用于验证嗜肺军团菌检测方法(如实时荧光定量 PCR、免疫层析法、培养法)的准确性,评估诊断试剂(如抗体检测试剂盒、抗原检测试纸)的灵敏度与特异性,辅助临床确诊军团菌病。
疫苗与药物研发:用于嗜肺军团菌疫苗候选抗原筛选、免疫原性评估,以及抗军团菌药物(如大环内酯类、喹诺酮类抗生素)的体外药敏试验,为新型疫苗与药物的研发提供实验模型。
环境监测与防控:作为环境水体中军团菌检测的阳性对照菌株,用于评估空调系统、热水管网、冷却塔等环境样本的检测流程,验证培养基(如 BCYE 培养基)的适用性,为公共卫生领域的军团菌污染防控提供技术支撑。
每批次产品均通过四重质量检测:纯度检测(涂布 BCYE 培养基与血琼脂平板,确保无杂菌污染,且血琼脂平板上无生长,验证营养依赖性特性)、活性检测(平板计数法,确保活菌数≥10⁶CFU / 支)、特性验证(API 20NE 生化鉴定、16S rRNA 基因测序及血清型鉴定,符合嗜肺军团菌血清型 1 型特征)、致病性验证(巨噬细胞感染试验,确认其细胞侵袭能力),随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
操作必须严格遵循《病原微生物实验室生物安全管理条例》,仅限经专业培训的实验人员在 BSL-3 实验室操作,穿戴正压防护服、防护面罩,使用专用生物安全柜;实验废弃物(含菌培养基、耗材、防护装备)需经 121℃高压蒸汽灭菌 60min 或采用化学消毒(如含氯消毒剂浸泡 24h)后处理;若发生菌液泄漏或人员暴露,需立即启动应急方案,隔离污染区域,对暴露人员进行医学观察,并上报当地疾控部门;收货后 24 小时内,若发现安瓿管破损、菌粉变色或复苏后无活菌,需在生物安全柜内妥善处理破损品,并立即联系售后办理退换货(退换货需符合致病性微生物运输管理规定)。


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