中文名称:伊万诺夫李斯特菌(曾称 “伊凡诺夫李斯特菌”)
拉丁学名:Listeria ivanovii
标准编号:ATCC19119、WDCM 00018
产品形式:冻干粉(含蔗糖 - 脱脂乳 - 谷氨酸复合保护剂,减少冻干过程中菌体活性损失,复苏率≥85%)
安全等级:2 级(致病性菌株,主要引起反刍动物(如牛羊)李斯特菌病,对人类偶发感染风险,免疫缺陷人群需严格防护,适用于生物安全二级实验室(BSL-2)专业操作)
模式菌株:非模式菌株(是李斯特菌属中典型的动物致病性菌株,常作为人畜共患李斯特菌病研究及物种鉴定的核心参照菌株)
分类地位:隶属于李斯特菌科、李斯特菌属,与单核细胞增生李斯特菌同属致病性类群,自然宿主以反刍动物为主,广泛存在于动物粪便、青贮饲料及受污染的土壤中,是兽医微生物与公共卫生领域重点关注的菌株
形态特征:菌落呈灰白色至淡黄色,直径 1-2mm,表面光滑、湿润,边缘整齐或轻微锯齿状,质地黏稠且半透明,在李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基、Oxford 培养基)上呈无色菌落,在血琼脂平板上形成宽大的 β- 溶血环(与单核细胞增生李斯特菌的狭窄 β- 溶血环、无害李斯特菌的无溶血环形成关键区分);菌体为革兰氏阳性,呈短杆状,大小约 0.5-0.8μm×1.0-2.0μm,常单个、成对或短链状排列,无芽孢,有周生鞭毛(20-25℃时运动活跃,呈 “翻筋斗” 样运动,37℃时运动能力减弱),革兰氏染色后显微镜下形态清晰。
生理特性:兼性厌氧菌,生长温度范围 1-42℃(低温适应性较强,可在 4-10℃冷藏环境缓慢繁殖),最适生长温度 30-37℃,生长 pH 范围 5.5-9.0,耐盐性较强(可在含 8% NaCl 的培养基中生长);能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、鼠李糖产酸不产气,不发酵木糖、甘露醇,甲基红试验阳性,V-P 试验阳性,不产生吲哚,不分解尿素,触酶试验阳性;具有动物致病性,携带李斯特菌溶血素 O(LLO)、内化素(InlA/B)及磷脂酶 C 等毒力基因,可在反刍动物巨噬细胞内寄生繁殖,引起动物败血症、脑膜炎及流产,对人类仅偶发感染(多与接触病畜相关)。
培养条件:推荐使用李斯特菌选择性培养基(如 PALCAM 培养基含头孢他啶、多粘菌素 B,Oxford 培养基含吖啶黄、多粘菌素 B)或血琼脂培养基,37℃有氧培养 24-48h(普通培养箱静置培养即可,含 5% CO₂环境可促进溶血环清晰形成),培养后在选择性培养基上可抑制杂菌,血琼脂平板上溶血特征明显;液体培养选用李斯特菌增菌肉汤(LEB)或营养肉汤培养基,37℃振荡培养(转速 150-200rpm)18-24h,菌体浓度可达 10⁹CFU/mL;若需观察运动性,建议在 22℃培养 24h,运动特征更显著。
活化步骤:严格在生物安全二级实验室生物安全柜内操作,无菌环境下开启安瓿管,用 0.5-1mL 无菌李斯特菌增菌肉汤(预热至 37℃)充分溶解菌粉,将菌液全部接种至血琼脂平板,37℃培养 24h 后,挑取单个具有典型溶血环的菌落转接至 5mL 李斯特菌增菌肉汤,37℃振荡培养 16h,即可获得高活性种子液(操作时严禁菌液飞溅,防止气溶胶传播)。
保存方法:未启封冻干粉 2-8℃密封避光保存,有效期 4 年;复苏后斜面菌种 4℃密封保存,每 1 个月继代一次,有效期 1.5 个月;长期保存需将对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 体积比混合,快速分装后 - 80℃冷冻保存,或真空冷冻干燥后 - 20℃保存,有效期均可达 3-4 年,严禁反复冻融(单次冻融活性损失≥30%),保存区域需与非致病菌株隔离。
兽医与公共卫生研究:作为动物李斯特菌病(如牛羊传染性流产、脑膜炎)的模型菌株,用于研究致病机制(如宿主细胞侵袭路径、毒力基因表达调控)、疫苗研发(如 subunit 疫苗候选抗原筛选)及治疗药物(如兽医专用抗生素)的体外药敏试验,为反刍动物李斯特菌病的防控提供技术支撑。
微生物检测与鉴定:作为李斯特菌属物种鉴定的阳性对照菌株,用于验证李斯特菌选择性培养基的特异性(通过溶血特征区分菌种)、检测方法(如实时荧光定量 PCR、 MALDI-TOF MS)的准确性,尤其适用于青贮饲料、动物产品(如生鲜乳、肉制品)中致病性李斯特菌的污染监测,符合 GB/T 28645-2012《畜禽产品中李斯特菌检测》要求。
科研与教学:用于李斯特菌属分类学研究,通过与单核细胞增生李斯特菌的毒力基因、宿主适应性对比,明确李斯特菌属的进化关系;作为微生物学教学实验(如细菌溶血试验、致病性微生物操作规范演示)的专用菌株,帮助学生掌握致病性李斯特菌的鉴别特征与安全操作要点。
每批次产品均通过四重质量检测:纯度检测(涂布营养琼脂、李斯特菌选择性培养基及血琼脂平板,确保无杂菌污染且溶血特征典型)、活性检测(平板计数法,确保活菌数≥10⁸CFU / 支)、特性验证(API Listeria 生化鉴定、16S rRNA 基因测序及毒力基因(LLO、InlA)检测,确认致病性特征)、稳定性检测(37℃加速试验验证保存期内活性与溶血特性稳定),随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
操作需在生物安全二级实验室进行,实验人员需经致病性微生物操作培训,穿戴无菌手套、防护口罩及实验服,全程在生物安全柜内处理菌液;实验废弃物(含菌培养基、耗材、防护用品)需经 121℃高压蒸汽灭菌 30min 后处理;若发生菌液泄漏,需立即用 1000mg/L 含氯消毒剂覆盖污染区域,作用 30 分钟后清理,暴露人员需进行医学观察;收货后 24 小时内,若发现安瓿管破损、菌粉变色或复苏后无典型溶血菌落,需在生物安全柜内妥善处理破损品,并立即联系售后办理退换货(退换货需符合致病性微生物运输管理规定)。


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