中文名称:考克氏菌(原分类中曾称 “藤黄微球菌”,后基于基因序列重新归类为考克氏菌属)
拉丁学名:Kocuria rhizophila
标准编号:ATCC9341
产品形式:冻干粉(含蔗糖 - 脱脂乳 - 谷氨酸复合保护剂,减少冻干过程中菌体活性损失与渗透压损伤,复苏率≥90%)
安全等级:1 级(生物危害程度低,广泛存在于土壤、植物根际、食品加工环境及人体皮肤表面,无致病性,适用于常规实验室质控、工业酶解、教学实验场景操作,无需特殊生物安全防护)
模式菌株:非模式菌株(是考克氏菌属中具有高效酶分泌能力的代表性菌株,因稳定的胞外酶活性、耐胁迫能力强等特点,在工业生物催化与食品加工质控领域应用广泛)
分类地位:隶属于微球菌科、考克氏菌属(原归类于微球菌属,20 世纪末基于 16S rRNA 基因测序与生化特性重新分类),广泛分布于土壤、植物根际、空气及低污染水体中,是环境中常见的非致病革兰氏阳性球菌,部分菌株因能产生淡黄色色素且具有八叠状排列特征,曾与藤黄微球菌混淆,后通过基因鉴定明确分类地位。
形态特征:菌落呈淡黄色至柠檬黄色,直径 1-2.5mm,表面光滑、凸起,边缘整齐,质地较疏松(区别于 ATCC533 的致密菌落),接种环挑取时易分散;菌体为革兰氏阳性,呈球形,直径 0.7-1.4μm,可形成八叠状排列(4 个细胞成方,2 层堆叠),也可见四联状或不规则聚集体(八叠状排列频率低于 ATCC533,液体培养中更易呈分散球状),无芽孢,无鞭毛,不能运动,革兰氏染色后显微镜下呈鲜亮紫色,形态鉴别性强(易与葡萄球菌的紧密葡萄状排列、微球菌的不规则聚集体区分)。
生理特性:专性好氧菌,最适生长温度 28-32℃(较 ATCC533 适应温度略高,37℃下仍可正常生长,生长速率下降不显著),生长 pH 范围 5.5-8.5(耐酸耐碱能力更强,可在 pH5.0 弱酸性环境中缓慢生长),耐盐性优异(可在含 5%-12% NaCl 的培养基中生长,高盐环境下酶活性保持稳定);能发酵葡萄糖、果糖、蔗糖产酸不产气,不发酵麦芽糖、乳糖、木糖,氧化酶试验阳性,触酶试验阳性,可高效分泌脂肪酶、蛋白酶及淀粉酶(酶活性显著高于 ATCC533,脂肪酶活性可达 150U/mL),不产生溶血素,不分解尿素,能快速还原硝酸盐;具备优异的耐干燥能力(干燥环境中可存活 8 个月以上)与耐低温能力(-20℃冷冻保存 6 个月后复苏率≥80%),对青霉素、头孢类抗生素敏感性高,对四环素类、大环内酯类抗生素耐受性较强;无致病性,不产生毒素,不会引起人体感染或动植物疾病,代谢过程中无有害次级产物。
培养条件:推荐使用营养琼脂培养基(NA)或酶分泌专用培养基(含 0.5% 蛋白胨、0.3% 酵母提取物、0.2% 橄榄油,pH7.0),30℃有氧培养 24-30h(普通培养箱静置培养即可,充足氧气可促进酶类合成,30℃培养时酶活性峰值高于 25℃);液体培养选用酶分泌专用肉汤,30℃振荡培养(转速 180-220rpm)18-22h,菌体浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL,菌液呈淡黄色浑浊状(酶活性在培养 20h 时达到峰值,脂肪酶活性最稳定);若需观察八叠状排列,建议在固体培养基上 30℃培养 30h,形态更典型。
活化步骤:无菌环境下(超净工作台内)开启安瓿管,用 0.5-1mL 无菌酶分泌专用肉汤(预热至 30℃)充分溶解菌粉,将菌液全部接种至营养琼脂平板,30℃培养 24h 后,挑取单个典型淡黄色菌落转接至 5mL 酶分泌专用肉汤,30℃振荡培养 18h,即可获得高活性种子液(操作简单,常规实验室环境即可完成,挑取菌落时优先选择边缘整齐、色素均匀的菌落,确保酶活性稳定)。
保存方法:未启封冻干粉 2-8℃密封避光保存,有效期 5 年;复苏后斜面菌种 4℃密封保存,每 2 个月继代一次,有效期 3 个月(继代时建议使用酶分泌专用培养基,避免频繁传代导致酶活性退化);长期保存需将对数生长期菌液与 30% 无菌甘油按 1:1 体积比混合,分装至冻存管后 - 80℃冷冻保存,或真空冷冻干燥后 - 20℃保存,有效期均可达 5 年,严禁反复冻融(单次冻融活性损失≤20%,酶活性损失≤10%,显著低于 ATCC533)。
工业生物催化与食品加工:因高效分泌脂肪酶、蛋白酶及淀粉酶,且酶活性稳定,广泛用于工业生物催化领域,如食品级脂肪酶生产(用于乳制品、烘焙食品的风味改良)、洗涤剂用蛋白酶研发(低温环境下仍保持高活性);在食品加工中,可用于果蔬汁酶解澄清(降解果胶与多糖类物质,提升果汁透明度)、肉制品嫩化(温和分解肌肉蛋白,改善口感),符合 GB 2760-2024《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中关于微生物酶制剂的使用要求。
微生物检测与质量控制:作为微生物实验室的核心质控菌株,用于验证酶活性检测培养基(如脂肪酶培养基、蛋白酶培养基)的适用性与无菌性,校准微生物计数方法(平板计数法、比浊法)的准确性;在食品、药品行业中,可作为食品加工环境(如乳制品车间、烘焙车间)微生物污染监测的指示菌株,评估环境洁净度与酶制剂使用安全性,符合 GB 4789.2-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》及 GB/T 20362-2006《动物源产品中金黄色葡萄球菌的检测》的质控要求(作为非致病阳性对照)。
环境监测与治理:因耐盐性优异,可作为高盐环境(如腌制食品加工车间、盐湖周边土壤)微生物多样性监测的参照菌株,评估高盐环境对微生物群落的影响;在环境治理领域,可作为土壤有机污染修复的伴生菌株,通过分泌脂肪酶、蛋白酶降解土壤中的油脂类、蛋白质类污染物,辅助改善污染土壤的微生物生态结构;同时可用于低污染水体的微生物活性监测,评估水体自净能力。
教学与科研实验:作为微生物学基础教学的经典实验菌株,用于革兰氏染色、菌落形态观察、酶活性测定(脂肪酶试验、蛋白酶试验)、微生物分类鉴别等实验,帮助学生掌握革兰氏阳性球菌的形态特征与代谢特性;在科研领域,可作为工业微生物改造的模型菌株,探索胞外酶分泌调控机制(如信号肽优化、启动子改造),也可用于耐盐微生物的基因挖掘,为极端环境微生物资源开发提供理论基础。
每批次产品均通过四重质量检测:纯度检测(涂布营养琼脂、血琼脂平板及酶活性检测培养基,确保无杂菌污染,菌落呈典型淡黄色且无溶血,酶活性达标)、活性检测(平板计数法,确保活菌数≥10⁸CFU / 支)、特性验证(API Staph 生化鉴定、16S rRNA 基因测序,符合Kocuria rhizophila典型生理生化与基因特征,分类地位准确)、酶活性检测(采用分光光度法测定脂肪酶、蛋白酶活性,确保脂肪酶活性≥120U/mL、蛋白酶活性≥80U/mL),随货附带完整 COA(分析报告),质量可追溯。
操作无需特殊生物安全防护,常规超净工作台即可完成;实验废弃物(含菌培养基、耗材)需经 121℃高压蒸汽灭菌 30min 后处理;收货后 24 小时内,若发现安瓿管破损、菌粉变色(非淡黄色至柠檬黄色)、复苏后菌落无黄色特征或酶活性不达标,可立即联系售后办理退换货。


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