形态:革兰氏阳性球菌,显微镜下呈疏松葡萄串状排列(排列松散度显著高于腐生葡萄球菌),无芽孢与鞭毛,部分菌株表面具极薄荚膜(需特殊染色才能观察),大小约 0.7-1.1μm。在普通营养琼脂上形成直径 1.0-2.0mm 的乳白色至淡黄色菌落,质地柔软、表面光滑且具轻微黏性(挑取时不易拉成丝,与腐生葡萄球菌的无黏性菌落区分),边缘整齐或轻微锯齿状;在血琼脂培养基上表现为 γ- 溶血(不溶血,与腐生葡萄球菌一致);在含 10% 氯化钠的高盐培养基上可正常生长(耐盐性强于腐生葡萄球菌的 7.5% 耐盐上限),且不发酵甘露醇(培养基不变色);在麦康凯培养基上不生长(与革兰氏阴性肠道菌区分),此高耐盐性是关键鉴别标志。
生理生化:兼性厌氧微生物,最适生长温度 30-35℃(适应多种动物体温,25-40℃范围内均可生长),最适 pH 值 6.8-7.5,对营养要求极低,在低营养培养基(如含 0.02% 碳源的基础培养基)中仍可生长,生长速度快于腐生葡萄球菌。生化反应中,触酶试验阳性(强阳性反应,气泡生成量大),凝固酶试验阴性(与腐生葡萄球菌一致),氧化酶试验阴性,硝酸盐还原试验阳性,甲基红试验阴性,VP 试验阳性(与腐生葡萄球菌的 VP 阴性区分);关键生化特性为氧化利用葡萄糖(非发酵型代谢,与腐生葡萄球菌的发酵型代谢区分),尿素酶试验阴性(与腐生葡萄球菌的尿素酶阳性明确区分);糖类发酵方面,可发酵蔗糖(产酸不产气),不发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖;毒力特性上,仅携带少量基础毒力基因(如生物膜形成基因 icaA,表达量低),对宿主细胞黏附能力弱,主要存在于动物皮肤、黏膜及环境中,极少引发动物或人类感染(仅免疫功能极度低下人群偶发局部感染),无明确人兽共患传播风险(风险低于腐生葡萄球菌)。
培养基:常规培养优先选用营养琼脂或 LB 培养基(30-35℃培养 18-24 小时,无需延长培养);动物样本分离(如松鼠皮肤拭子、兔鼻腔样本)推荐使用血琼脂培养基(观察不溶血特性);与腐生葡萄球菌鉴别需使用 10% 氯化钠高盐培养基(验证高耐盐性)与尿素培养基(验证尿素酶阴性);药物敏感性试验需采用 MH 培养基(符合 CLSI 兽医标准);环境样本分离可选用低营养基础培养基(筛选低营养耐受菌株)。
操作:固体培养置于 30-35℃恒温培养箱静置 18-24 小时,可形成形态典型的单菌落(需重点观察耐盐性);液体培养采用 30-35℃、150-180rpm 摇床振荡培养 16-20 小时,培养后期菌液呈均匀浑浊状(浊度高于腐生葡萄球菌),菌浓度可达 10⁹-10¹⁰CFU/mL,且能最大程度保留高耐盐特性。传代次数建议控制在 5 代以内,温度波动需≤±1℃,避免因传代过多导致耐盐性减弱或代谢特性改变。
短期(1-2 周):取 30-35℃培养 18 小时的纯培养菌株(需确认凝固酶阴性、高耐盐性、尿素酶阴性),接种至营养琼脂斜面培养基,30℃培养 12 小时后,密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 4-5 天观察一次菌株状态(观察频率低于腐生葡萄球菌),若发现菌落干燥、污染,需及时重新接种(30-35℃复壮),防止菌株失活。
长期(3 年以上):推荐两种高效保存方法:①冷冻干燥保存法:取对数生长期菌液(OD600=0.8-1.0,培养 16 小时),与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀,分装至无菌冷冻管(每管 0.5mL),经 - 20℃预冻 3 小时、-80℃冷冻 6 小时梯度降温后进行冷冻干燥,干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存,保存期限可达 5-8 年,复苏后高耐盐性保留率≥98%;②甘油冷冻保存法:将对数生长期菌液与无菌甘油(终浓度 20%,与腐生葡萄球菌一致)混合均匀,分装至无菌冷冻管(每管 1mL),直接放入 - 80℃冰箱保存,保存期限 3-5 年,操作简便(复苏时需接种至 10% 高盐培养基验证耐盐性)。长期保存需每 12 个月复苏一次,复苏后通过革兰氏染色、凝固酶试验、高耐盐性检测、尿素酶试验及代谢类型鉴定,全面确认菌株纯度、生理活性与核心特性,确保后续实验使用效果。


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