形态与生化:菌体呈短杆状或球杆状,大小(0.3-0.6)μm×(1.0-2.0)μm,两端钝圆,无芽孢,无鞭毛(无运动性),常单个、成对或短链状排列,多数菌株无明显荚膜。最适生长温度 35-37℃,兼性厌氧(含 5%-10% CO₂的环境可显著提升生长效率,保障生化反应稳定性),适宜 pH 7.2-7.6;核心生长特性为 “需 V 因子(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,NAD),无需 X 因子(氯化血红素)”(与流感嗜血杆菌 “需 X+V 双因子” 的特性形成核心鉴别,是区分两者的关键标志);生化特征稳定:发酵葡萄糖、半乳糖产酸(不产气),部分菌株可发酵蔗糖,不发酵乳糖、甘露醇,氧化酶阳性,触酶阳性,硝酸盐还原试验阳性,吲哚试验阴性,尿素酶试验阳性(部分菌株),这些特性是副流感嗜血杆菌精准鉴别的核心依据。
致病性相关:属于条件致病菌,主要定植于人类鼻咽部、口腔黏膜,是健康人群呼吸道正常菌群的组成部分,毒力较低;仅在机体免疫功能低下(如老年人、慢性肺部疾病患者、免疫缺陷人群)时,可能引发呼吸道局部感染(如慢性支气管炎急性发作、肺炎、中耳炎),偶可导致败血症等全身性感染,但发生率远低于流感嗜血杆菌。ATCC 7901 因毒力稳定且无显著致病风险,常作为 “安全模式株”,用于与致病性嗜血杆菌(如流感嗜血杆菌 a 型、f 型)的对比研究,及微生物教学实验、新手操作训练中的安全实验材料。
培养:需 V 因子营养支持与适宜 CO₂环境,推荐使用含 5%-10% CO₂的培养箱。推荐培养基包括:含 V 因子的巧克力琼脂(或在普通营养琼脂中添加 V 因子,用于菌株活化与纯培养,菌落呈圆形、半透明至乳白色,直径 0.5-1.0mm,边缘整齐,质地柔软,培养 24-48 小时后表面光滑无特殊异味)、副流感嗜血杆菌选择性琼脂(在含 V 因子的基础琼脂中添加万古霉素、杆菌肽等抗生素,抑制革兰氏阳性菌及杂菌生长,适用于临床标本中副流感嗜血杆菌的分离纯化)、脑心浸液肉汤(添加 V 因子,用于菌株增菌,37℃ CO₂环境振荡培养 18-24 小时后,菌液呈轻度至中度浑浊,OD600 值约 0.3-0.5)。培养过程中需避免温度波动(低于 32℃或高于 38℃易导致生长停滞),CO₂浓度需稳定在 ±2% 以内,防止影响菌株生长状态与生化特性;同时需通过 “因子需求试验”(分别在含 X 因子、V 因子、X+V 因子的培养基上接种,验证仅在含 V 因子的培养基上生长)确认菌株特性。
保存:短期保存(1-2 周):将纯化后的菌株接种至含 V 因子的营养琼脂斜面,37℃ CO₂环境培养 24 小时后,密封斜面管口(防止培养基水分流失与杂菌污染),置于 4℃冰箱冷藏,期间每 3-5 天观察 1 次(因菌株对营养需求较高,低温保存易失活),若出现菌落萎缩、变色或污染,需立即重新活化;长期保存(1 年以上):采用 - 80℃甘油冷冻保存(20% 无菌甘油与对数期菌液按 1:1 体积混合,菌液需取自新鲜含 V 因子的肉汤,分装至无菌冻存管,避免反复冻融破坏菌株特性),或冻干保存(以 10% 脱脂乳 + 0.1% V 因子为保护剂,冻干过程维持低温干燥,冻干后置于 - 20℃以下干燥环境)。复苏时,将冻存菌液或冻干菌粉在无菌条件下接入含 V 因子的脑心浸液肉汤,37℃ CO₂环境振荡培养 18-24 小时,待菌液浑浊后转接含 V 因子的固体培养基纯化,复苏后需通过 “因子需求试验” 与生化反应验证,确保菌株特性未发生改变。
应用:在临床检测领域,作为副流感嗜血杆菌感染检测的质控株,用于验证含 V 因子培养基的性能(促生长能力与选择性),帮助实验室区分副流感嗜血杆菌与流感嗜血杆菌,确保呼吸道感染诊断的准确性;在科研领域,作为嗜血杆菌属分类学研究的模式株,用于基因序列分析(如 16S rRNA 测序)、微生物检测技术(如快速核酸检测)研发中的阳性对照,及副流感嗜血杆菌与其他呼吸道微生物(如肺炎链球菌、卡他莫拉菌)互作机制研究;在工业领域,作为微生物检测试剂(如生化鉴定试剂盒、选择性培养基)生产企业的出厂质控株,验证试剂性能稳定性与准确性;在教学领域,用于微生物学基础实验,演示 “细菌营养需求差异”(对比流感嗜血杆菌与副流感嗜血杆菌的因子需求)、“革兰氏阴性杆菌形态观察”“生化反应原理” 等内容,帮助学习者掌握嗜血杆菌属不同菌种的鉴别方法。
安全:常规操作可在生物安全一级(BSL-1)实验室进行(因毒力低、无明确致病风险);涉及菌液移液、离心等可能产生气溶胶的操作时,需佩戴无菌手套、一次性口罩,必要时佩戴护目镜,避免皮肤接触菌液或吸入气溶胶;实验结束后,所有污染耗材(培养皿、移液器吸头、离心管、接种环)需经 121℃高压灭菌 30 分钟(确保彻底杀灭菌株),实验台面用含氯消毒剂(有效氯 1000mg/L)擦拭消毒,再用 75% 乙醇二次消毒;菌株储存需单独存放于专用冰箱,冻存管外清晰标注 “ATCC 7901 副流感嗜血杆菌(需 V 因子,无需 X 因子)- 非致病参考株”、保存日期,避免与致病性嗜血杆菌(如流感嗜血杆菌 a 型、f 型)或其他呼吸道病原体混合存放,防止交叉污染导致实验结果偏差。


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