生物安全与来源:生物安全等级为 1 级,无强致病性,在常规实验室规范操作(如超净台内接种、使用无菌实验耗材)下,不会对操作人员健康及实验环境造成危害。该菌株分离自临床相关环境,其生物学特性与临床常见粪肠球菌菌株高度契合,既能模拟肠道正常菌群的生理状态,也可用于研究粪肠球菌在特定条件下的表型变化,是连接基础科研与实际应用的重要菌株。
形态与培养特性:属于革兰氏阳性球菌,显微镜下多呈短链状排列,部分呈成对分布,无芽孢、无鞭毛,不具备自主运动能力,可通过链状形态与呈葡萄状簇集的葡萄球菌快速区分。兼性厌氧,对营养需求较低,在脑心浸液琼脂(BHI)、胰酪大豆琼脂(TSA)、血琼脂等常规培养基中均能良好生长;最适生长温度为 35-37℃,可耐受 10-45℃的宽温度范围,同时能在含 6.5% 氯化钠的高盐环境及 pH 9.6 的碱性环境中存活,符合粪肠球菌属的共性特征。菌落形态为圆形、表面光滑湿润、颜色呈乳白色,直径约 1-2mm,在血琼脂平板上通常表现为 α- 溶血(草绿色溶血环),这一溶血特性是其与其他肠球菌物种鉴别的重要直观依据之一。
生化特性:生化反应稳定且具有物种代表性,是粪肠球菌鉴别的关键标志:能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇等多种糖类物质,发酵过程中产酸不产气;触酶试验结果为阴性,胆汁七叶苷试验、精氨酸双水解试验均为阳性,且 PYR(吡咯烷酮芳基酰胺)试验阳性 —— 这些生化特征与临床分离的粪肠球菌完全一致,同时其部分特定生化表型经过长期验证,可作为相关检测方法的标准对照依据,确保检测结果的准确性。
未开封状态:产品主要以冻干粉形式进行真空密封包装,每支冻干粉含一定数量的活菌(具体活菌数量以 ATCC 官方标注为准),未开封时需置于 - 20℃以下冷冻环境保存;若需长期储存(超过 6 个月),建议放入 - 80℃冰箱,可最大程度保持菌株活性。储存过程中严禁反复冻融,反复冻融会破坏菌株细胞结构,导致活菌数量大幅减少,同时可能影响菌株的生化及药敏等关键表型,进而干扰实验结果的可靠性。冻干粉保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 2-3 年,在规范储存条件下,菌株活性衰减缓慢。
复苏后状态:菌株复苏后的菌液(经 TSB 或 BHI 培养基培养)或斜面培养物(接种于 TSA 斜面),需在 2-8℃冷藏环境中保存。由于该菌株代谢相对活跃,长期冷藏易因代谢产物积累导致活性下降,因此建议 7-10 天内进行一次传代培养,传代时需使用新鲜的培养基,确保菌株的生物学特性保持稳定,为后续实验提供可靠的菌种来源。
复苏操作:在无菌环境下打开冻干粉包装,向其中加入 1mL 无菌的胰酪大豆肉汤(TSB)或脑心浸液(BHI)培养基,轻轻吹吸 3-5 次,使冻干粉完全溶解,随后将菌液转移至无菌试管中,置于 35-37℃培养箱中静置培养 16-18 小时。待菌液出现明显浑浊,且 OD600 值达到 0.8-1.0(此时菌株处于对数生长期,生物学特性最稳定)时,即可用于后续实验操作。
传代培养:用无菌接种环蘸取少量复苏后的菌液,在血琼脂平板上采用分区划线法进行接种,之后将平板置于 35-37℃培养箱中培养 16 小时。待平板上形成单菌落后,挑取形态典型(圆形、乳白色、光滑、具有 α- 溶血环)的单菌落,可直接用于实验,也可转接至 TSA 斜面培养基,在 35-37℃培养箱中培养 24 小时后,置于 2-8℃冷藏保存。为避免菌株特性漂移,斜面菌种建议传代次数不超过 3 代。
应用操作:在临床微生物检测领域,可用于验证抗菌药物敏感性测试(AST)相关设备及试剂(如药敏试纸条、全自动药敏分析仪)的准确性,依据 CLSI 标准判断检测结果是否可靠;在微生物鉴定方面,可作为阳性对照,用于验证生化鉴定试剂盒(如 API 20 STREP)、微生物质谱检测系统(MALDI-TOF MS)对粪肠球菌的鉴定能力。在科研领域,适用于粪肠球菌代谢途径解析、耐药基因筛选及肠道菌群互作机制等研究,还可用于食品与环境领域中粪肠球菌污染检测方法的验证,确保检测结果的特异性和准确性。


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