生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无强致病性，属于人类肠道正常菌群，同时广泛存在于发酵食品中，常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无危害。该菌株分离自临床健康人群肠道样本，其生物学特性与人类肠道及食品中天然存在的粪肠球菌高度一致，既能模拟临床非致病粪肠球菌的药敏表型，也能适配食品微生物检测场景，是跨领域应用的理想对照菌株。
形态与培养特性：属于革兰氏阳性球菌，归为肠球菌科，具有典型的球菌形态与高适应性培养特征：
显微镜形态：菌体呈圆形或椭圆形，直径 0.5-1.0μm，常呈短链状排列（链长 3-5 个菌体，偶见成对），无芽孢、无鞭毛（非运动型菌株，区别于部分运动性粪肠球菌），革兰氏染色呈均匀紫色（着色稳定，无两极浓染，可与革兰氏阴性菌快速区分）；
培养要求：兼性厌氧，对营养需求低，在胰酪大豆琼脂（TSA）、脑心浸液琼脂（BHI）、血琼脂及麦康凯琼脂（部分肠球菌可生长）中均能快速生长；最适生长温度 35-37℃（适配人体肠道与食品加工环境），可耐受 10-45℃宽温度范围，且能在 6.5% NaCl 高盐环境、pH 9.6 碱性环境及 40% 胆汁培养基中生长（肠球菌属核心耐受特性），生长速度快，37℃培养 18-24 小时形成明显菌落；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成直径 1-2mm 的菌落，圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、呈乳白色不透明（质地柔软，挑取时易拉丝）；在血琼脂平板上，表现为α- 溶血（草绿色溶血环，溶血环窄且清晰，区别于 γ- 溶血的杜兰斯肠球菌）；在麦康凯琼脂上，因不发酵乳糖，菌落呈无色透明至淡黄色（可与发酵乳糖的大肠杆菌区分），通过溶血特性与高盐耐受能力，可快速鉴别于其他革兰氏阳性球菌（如链球菌）。
生化与药敏特性：生化反应具有物种代表性，是粪肠球菌鉴定的核心参照：能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇产酸不产气（发酵速度均一，无批次差异）；触酶试验阴性（区别于葡萄球菌）、氧化酶试验阴性；胆汁七叶苷试验阳性（能分解七叶苷，形成黑色沉淀）、PYR（吡咯烷酮芳基酰胺）试验阳性（核心鉴别特征）、精氨酸双水解试验阳性；不产生硫化氢，不分解尿素。核心优势在于药敏表型稳定：经 CLSI（美国临床和实验室标准协会）标定，该菌株对青霉素类（氨苄西林）、头孢类（头孢曲松，中度敏感）、氨基糖苷类（庆大霉素，低浓度敏感）、万古霉素等常见抗菌药物敏感性明确，每种药物的最小抑菌浓度（MIC）均有标准范围（如氨苄西林 MIC 0.5-2μg/mL，万古霉素 MIC 0.5-2μg/mL），是 AST 质控与药敏方法验证的可靠标尺。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^7-10^8 CFU / 支活菌，含肠球菌专用保护剂） 或标准化甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 1 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 50% 以上，破坏药敏与生化特性稳定性）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 3 年（专用保护剂可维持菌体链状排列与耐受特性，解冻后表型无漂移）；
甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置（室温暴露 1 小时可导致菌体活力下降 30%），保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1-2 分钟），解冻后轻轻颠倒混匀，一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 5-7 天内使用完毕（粪肠球菌代谢活跃，长期冷藏易导致菌体老化）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 2 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基，避免药物残留影响药敏表型；使用前需通过涂片镜检（确认菌体短链形态正常、无杂菌）及生化预实验（验证 PYR 试验阳性），确保菌株特性符合实验要求。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤（TSB），轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至无菌试管，37℃培养箱振荡培养（180rpm）12-16 小时；待菌液呈均匀浑浊状（OD600 值约 0.6-0.8，处于对数生长期，药敏表型最稳定）、镜检可见典型短链状球菌时，即可用于实验；
甘油菌复苏：从 - 80℃取出甘油菌后，立即 37℃水浴解冻，用无菌枪头吸取 100μL 菌液接种至含 5mL TSB 肉汤的无菌试管中，37℃振荡培养 12-16 小时，待菌液浑浊后使用，无需再次稀释（浓度已标准化，适配药敏与计数实验）。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（确保单菌落分离，便于纯化菌株），37℃培养 18-24 小时；待平板形成单菌落后，挑取形态典型（圆形、乳白色、α- 溶血）的单菌落，可直接用于实验，或转接至 TSA 斜面培养基，37℃培养 24 小时后，2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 5 代以内（避免长期传代导致溶血特性或药敏表型漂移），每次传代后需通过血琼脂培养验证 α- 溶血特征，确保菌株质量。
应用操作：
临床 AST 质控：作为 CLSI 推荐的粪肠球菌药敏质控菌株，用于验证全自动药敏分析仪（VITEK 2、BD Phoenix）、药敏试纸条、微量肉汤稀释法的准确性，如确认氨苄西林、万古霉素的 MIC 值在标准范围，偏离则需校准设备或更换试剂，为临床粪肠球菌感染（如尿路感染、败血症）合理用药提供参照；
食品微生物检测：用于乳制品、肉制品、饮用水中肠球菌污染检测方法的验证，如评估选择性培养基（如肠球菌琼脂）的分离效果、实时荧光 PCR 检测的特异性，通过模拟食品污染实验（将该菌株添加至无菌食品样本中），验证检测流程的灵敏度与重复性，保障食品安全；
微生物鉴定验证：作为阳性对照，校准生化鉴定试剂盒（如 API 20 Strep）、微生物质谱检测系统（MALDI-TOF MS）对粪肠球菌的鉴定能力，辅助区分粪肠球菌与近缘肠球菌（如屎肠球菌、鸡肠球菌），避免鉴定失误；
科研与教学：在科研领域，用于粪肠球菌耐药机制研究（如耐药基因筛选）、肠道菌群互作实验（与大肠杆菌等共培养）；在微生物教学中，用于演示革兰氏染色、球菌形态观察及生化反应操作，帮助学习者掌握肠球菌的鉴别要点。
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