生物安全与来源：生物安全等级为 1 级（BSL-1），无强致病性，广泛存在于发酵食品（如奶酪、发酵豆制品）及土壤中，对人类仅在免疫低下时可能引发轻微感染，常规实验室规范操作（超净台接种、无菌耗材使用）下，对操作人员及环境无危害。该菌株分离自天然发酵食品样本，其生物学特性与食品中天然存在的塞黄肠球菌高度一致，既能模拟食品发酵过程中肠球菌的色素生成与代谢行为，也能适配临床肠球菌耐药质控场景，是兼具食品与临床应用价值的特色菌株。
形态与培养特性：属于革兰氏阳性球菌，归为肠球菌科，具有典型球菌形态与独特色素生成特征：
显微镜形态：菌体呈圆形或椭圆形，直径 0.6-1.2μm，常呈短链状排列（链长 2-5 个菌体，偶见单个或成对），无芽孢，部分菌株具有弱鞭毛（ATCC 700327 为非运动型），革兰氏染色呈均匀紫色（着色稳定，无褪色现象，可与革兰氏阴性菌快速区分）；
培养要求：兼性厌氧，对营养需求低，在胰酪大豆琼脂（TSA）、脑心浸液琼脂（BHI）、血琼脂及肠球菌选择性琼脂（如 KEN 培养基）中均能快速生长；最适生长温度 30-37℃（适配食品发酵与人体肠道温度），可耐受 8-45℃宽温度范围，且能在 6.5% NaCl 高盐环境、pH 9.6 碱性环境及 40% 胆汁培养基中生长（肠球菌属共性，但该菌株耐盐性略强于普通肠球菌），生长速度快，37℃培养 18-24 小时形成明显菌落，且培养过程中会分泌黄色色素（色素生成受温度影响小，30-37℃均稳定产生）；
菌落形态：在 TSA 平板上，形成直径 1-1.5mm 的菌落，圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、呈淡黄色至深黄色（色素均匀分布，核心鉴别特征，区别于其他无色肠球菌）；在血琼脂平板上，表现为γ- 溶血（无溶血环，与粪肠球菌的 α- 溶血形成对比）；在麦康凯琼脂上，因不发酵乳糖，菌落呈淡黄色透明（色素不随培养时间加深，可与其他产色素细菌区分），通过色素颜色与溶血类型，可快速鉴别于肠球菌属内其他物种。
生化与药敏特性：生化反应具有物种特异性，是塞黄肠球菌鉴定的核心参照：能发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇产酸不产气，不发酵乳糖、山梨醇（与粪肠球菌差异显著，粪肠球菌可发酵乳糖）；触酶试验阴性（区别于葡萄球菌）、氧化酶试验阴性；胆汁七叶苷试验阳性（能分解七叶苷形成黑色沉淀）、PYR（吡咯烷酮芳基酰胺）试验阳性、精氨酸双水解试验阴性（与粪肠球菌的阳性结果形成鲜明对比，核心鉴别指标）；不产生硫化氢，不分解尿素，且能稳定产生黄色类胡萝卜素色素（乙醇提取后可在 450nm 处检测到特征吸收峰，可作为分子鉴定辅助依据）。核心优势在于独特的耐药表型：经 CLSI 标定，该菌株对万古霉素具有天然低水平耐药性（MIC 4-8μg/mL），对青霉素类（氨苄西林）、氨基糖苷类（庆大霉素）敏感，对四环素类药物（四环素）中度敏感，每种药物的 MIC 值均有明确标准范围，尤其适用于临床万古霉素低耐药肠球菌检测方法验证与食品抗菌剂残留筛查。
未开封状态：产品主要以冻干粉（真空密封包装，含 10^7-10^8 CFU / 支活菌，含色素保护剂） 或标准化甘油菌悬液（20% 甘油，10^6 CFU/mL，-80℃专用） 形式供应：
冻干粉：未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存，长期储存（超过 1 年）建议放入 - 80℃冰箱，严禁反复冻融（反复冻融会使活菌率下降 60% 以上，破坏色素生成能力与耐药表型）；保质期以 ATCC 官方标注为准，通常为 3 年（专用保护剂可维持菌体色素合成相关基因稳定，解冻后色素生成能力无漂移）；
甘油菌悬液：未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存，不可室温或冷藏放置（室温暴露 1 小时可导致活菌率下降 40%，且色素易氧化降解），保质期 2 年；解冻时需 37℃水浴快速溶解（1-2 分钟），解冻后轻轻颠倒混匀，一次性使用，剩余菌液需灭菌后丢弃，不可再次冷冻。
复苏后状态：复苏后的菌液（TSB 肉汤培养）需在 2-8℃冷藏保存，建议 7 天内使用完毕（该菌株代谢速率略慢于粪肠球菌，且色素在低温下更稳定）；复苏后的斜面培养物（TSA 斜面）需 2-8℃冷藏保存，建议 2-3 周内传代一次，传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基，避免药物残留影响药敏表型；使用前需通过涂片镜检（确认菌体短链形态正常、无杂菌）及生化预实验（验证精氨酸双水解试验阴性、黄色色素生成正常），确保菌株特性符合实验要求。
复苏操作：
冻干粉复苏：无菌环境下（超净台内），向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤（TSB），轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解（避免产生气泡），转移至无菌试管，37℃培养箱振荡培养（180rpm）14-18 小时；待菌液呈均匀浑浊状且带有淡黄色（色素溶解于培养液，OD450 值约 0.2-0.3，处于对数生长期，药敏表型最稳定）、镜检可见典型短链状球菌时，即可用于实验；若需验证色素特性，可取 1mL 复苏菌液离心（5000rpm，5 分钟），沉淀用无菌生理盐水洗涤 2 次后，加入 1mL 乙醇振荡提取，450nm 处检测吸光度（应出现特征吸收峰）；
甘油菌复苏：从 - 80℃取出甘油菌后，立即 37℃水浴解冻，用无菌枪头吸取 100μL 菌液接种至含 5mL TSB 肉汤的无菌试管中，37℃振荡培养 14-18 小时，待菌液浑浊且呈淡黄色后使用，无需再次稀释（浓度已标准化，适配食品质控与药敏实验）。
传代培养：在超净台内，用无菌接种环蘸取少量复苏菌液，在 TSA 平板上分区划线（确保单菌落分离，便于纯化菌株），37℃培养 18-24 小时；待平板形成单菌落后，挑取形态典型（圆形、淡黄色、湿润、γ- 溶血）的单菌落，可直接用于实验，或转接至 TSA 斜面培养基，37℃培养 24 小时后，2-8℃冷藏保存；传代次数严格控制在 5 代以内（避免长期传代导致色素生成能力或万古霉素低耐药表型漂移），每次传代后需通过血琼脂培养验证 γ- 溶血特征及 TSA 平板观察色素颜色，确保菌株质量。
应用操作：
食品微生物质控：作为核心质控菌株，用于发酵乳制品（如奶酪、发酵乳）、植物源发酵食品（如纳豆、腐乳）中塞黄肠球菌的鉴定与污染筛查，验证选择性培养基（如添加万古霉素的肠球菌琼脂）的分离效果、实时荧光 PCR 检测的特异性；通过模拟食品发酵实验（将该菌株添加至原料乳或大豆原料中），评估其产酸能力、色素生成规律对食品风味与色泽的影响，为食品发酵工艺优化提供参照；
临床耐药检测校准：作为万古霉素低耐药肠球菌标准菌株，用于验证全自动药敏分析仪（VITEK 2、BD Phoenix）、药敏试纸条对低耐药肠球菌的检测准确性，尤其适用于区分天然低耐药与获得性高耐药肠球菌（如该菌株 MIC 4-8μg/mL，获得性耐药菌株 MIC≥32μg/mL），避免临床用药误判；
微生物鉴定验证：作为阳性对照，校准生化鉴定试剂盒（如 API 20 Strep）、微生物质谱检测系统（MALDI-TOF MS）对塞黄肠球菌的鉴定能力，重点验证色素生成、精氨酸双水解试验等差异化指标，辅助区分肠球菌属内近缘物种（如粪肠球菌、海拉肠球菌）；
科研与教学：在科研领域，用于肠球菌色素合成机制研究（如类胡萝卜素合成基因克隆）、万古霉素天然耐药机制探索（如细胞壁合成相关基因功能分析）；在微生物教学中，用于演示产色素细菌的形态观察、肠球菌耐药表型检测操作，帮助学习者掌握特色肠球菌的鉴别要点与耐药检测方法。
客服1