生物安全与来源:生物安全等级为 1 级(BSL-1),无强致病性,广泛存在于人类肠道及发酵食品中,仅在免疫低下人群中可能引发机会性感染,常规实验室规范操作(超净台接种、无菌耗材使用)下,对操作人员及环境无危害。该菌株分离自健康人类肠道样本,其生物学特性与临床非致病屎肠球菌及食品中天然存在的屎肠球菌高度一致,既能模拟临床屎肠球菌的药敏表型,也能适配食品微生物检测场景,是跨领域应用的理想标准菌株。
形态与培养特性:属于革兰氏阳性球菌,归为肠球菌科,具有典型球菌形态与高环境适应性:
显微镜形态:菌体呈圆形或椭圆形,直径 0.5-1.0μm,常呈短链状排列(链长 2-4 个菌体,偶见成对,链长显著短于粪肠球菌),无芽孢、无鞭毛(非运动型菌株,区别于部分运动性肠球菌),革兰氏染色呈均匀紫色(着色稳定,无两极浓染,可与革兰氏阴性菌快速区分);
培养要求:兼性厌氧,对营养需求低,在胰酪大豆琼脂(TSA)、脑心浸液琼脂(BHI)、血琼脂及肠球菌选择性琼脂(如 KEN 培养基)中均能快速生长;最适生长温度 35-37℃(适配人体肠道与食品加工环境),可耐受 10-45℃宽温度范围,且能在 6.5% NaCl 高盐环境、pH 9.6 碱性环境及 40% 胆汁培养基中生长(肠球菌属共性,但该菌株耐碱性略强于粪肠球菌),生长速度快,37℃培养 18-24 小时形成明显菌落;
菌落形态:在 TSA 平板上,形成直径 0.8-1.5mm 的菌落,圆形、表面光滑干燥(质地较硬,挑取时不易拉丝,区别于粪肠球菌的湿润菌落)、边缘整齐、呈乳白色不透明;在血琼脂平板上,表现为γ- 溶血(无溶血环,核心鉴别特征,与 α- 溶血的粪肠球菌形成鲜明对比);在麦康凯琼脂上,因不发酵乳糖,菌落呈无色透明至淡黄色(可与发酵乳糖的大肠杆菌区分),通过溶血类型与菌落质地,可快速鉴别于肠球菌属内其他物种。
生化与药敏特性:生化反应具有物种特异性,是屎肠球菌鉴定的核心参照:能发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气,不发酵乳糖、甘露醇、山梨醇(与粪肠球菌差异显著,粪肠球菌可发酵乳糖、甘露醇);触酶试验阴性(区别于葡萄球菌)、氧化酶试验阴性;胆汁七叶苷试验阳性(能分解七叶苷形成黑色沉淀)、PYR(吡咯烷酮芳基酰胺)试验阳性、精氨酸双水解试验阳性;不产生硫化氢,不分解尿素。核心优势在于药敏表型稳定且具有临床参照价值:经 CLSI(美国临床和实验室标准协会)标定,该菌株对青霉素类(氨苄西林)、氨基糖苷类(庆大霉素,低浓度敏感)、万古霉素等常见抗菌药物敏感性明确,每种药物的最小抑菌浓度(MIC)均有标准范围(如氨苄西林 MIC 1-4μg/mL,万古霉素 MIC 0.5-2μg/mL),同时对喹诺酮类药物(环丙沙星)中度敏感,是 AST 质控与临床屎肠球菌感染用药参照的可靠标尺。
未开封状态:产品主要以冻干粉(真空密封包装,含 10^7-10^8 CFU / 支活菌,含肠球菌专用保护剂) 或标准化甘油菌悬液(20% 甘油,10^6 CFU/mL,-80℃专用) 形式供应:
冻干粉:未开封时需置于 - 20℃以下冷冻保存,长期储存(超过 1 年)建议放入 - 80℃冰箱,严禁反复冻融(反复冻融会使活菌率下降 50% 以上,破坏药敏与生化特性稳定性);保质期以 ATCC 官方标注为准,通常为 3 年(专用保护剂可维持菌体短链排列与耐碱特性,解冻后表型无漂移);
甘油菌悬液:未开封时需直接置于 - 80℃冷冻保存,不可室温或冷藏放置(室温暴露 1 小时可导致菌体活力下降 30%),保质期 2 年;解冻时需 37℃水浴快速溶解(1-2 分钟),解冻后轻轻颠倒混匀,一次性使用,剩余菌液需灭菌后丢弃,不可再次冷冻。
复苏后状态:复苏后的菌液(TSB 肉汤培养)需在 2-8℃冷藏保存,建议 5-7 天内使用完毕(屎肠球菌代谢活跃,长期冷藏易导致菌体老化);复苏后的斜面培养物(TSA 斜面)需 2-8℃冷藏保存,建议 2 周内传代一次,传代时需使用无抗菌药物的新鲜培养基,避免药物残留影响药敏表型;使用前需通过涂片镜检(确认菌体短链形态正常、无杂菌)及生化预实验(验证不发酵乳糖、甘露醇的特性),确保菌株特性符合实验要求。
复苏操作:
冻干粉复苏:无菌环境下(超净台内),向冻干粉中加入 1mL 无菌胰酪大豆肉汤(TSB),轻轻吹吸 5-6 次使粉末完全溶解(避免产生气泡),转移至无菌试管,37℃培养箱振荡培养(180rpm)12-16 小时;待菌液呈均匀浑浊状(OD600 值约 0.6-0.8,处于对数生长期,药敏表型最稳定)、镜检可见典型短链状球菌时,即可用于实验;若需验证生化特性,可将复苏菌液接种至乳糖发酵管与甘露醇发酵管,37℃培养 24 小时,观察无发酵现象(培养基不变色);
甘油菌复苏:从 - 80℃取出甘油菌后,立即 37℃水浴解冻,用无菌枪头吸取 100μL 菌液接种至含 5mL TSB 肉汤的无菌试管中,37℃振荡培养 12-16 小时,待菌液浑浊后使用,无需再次稀释(浓度已标准化,适配药敏与计数实验)。
传代培养:在超净台内,用无菌接种环蘸取少量复苏菌液,在 TSA 平板上分区划线(确保单菌落分离,便于纯化菌株),37℃培养 18-24 小时;待平板形成单菌落后,挑取形态典型(圆形、乳白色、干燥、γ- 溶血)的单菌落,可直接用于实验,或转接至 TSA 斜面培养基,37℃培养 24 小时后,2-8℃冷藏保存;传代次数严格控制在 5 代以内(避免长期传代导致溶血特性或药敏表型漂移),每次传代后需通过血琼脂培养验证 γ- 溶血特征,确保菌株质量。


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