生物安全与来源:生物安全等级为 2 级(BSL-2),具成人慢性感染倾向性,易在成人呼吸道定植并引发反复感染,操作需在生物安全柜内进行,器具使用后需 121℃高压灭菌 30 分钟。菌株分离自 COPD 急性加重患者痰液样本,生物学特性与成人慢性呼吸道 NTHi 分离株高度一致,可模拟成人慢性感染状态下的生物膜形成与定植耐药表型。
形态与培养特性:革兰氏阴性球杆菌,具双因子营养依赖特征:
显微镜形态:菌体呈球杆状(0.4-0.6μm×1.0-1.8μm),较儿童感染株更长,常呈短链排列(适配生物膜聚集生长),无芽孢、无鞭毛,革兰氏染色呈均匀淡红色(易脱色,染色时间控制 20-30 秒),无荚膜;
培养要求:兼性厌氧,需 5%-10% CO₂环境,最适培养基为巧克力琼脂、含 X/V 因子的成人呼吸道菌选择性琼脂(添加黏附促进剂模拟生物膜环境),最适温度 35-37℃,生长速度中等(24-48 小时形成菌落),普通营养琼脂不生长;
菌落形态:巧克力琼脂上呈圆形、表面略粗糙(因生物膜相关物质分泌)、边缘整齐的灰白色半透明菌落(直径 0.8-1.2mm,大于儿童感染株),质地较韧,挑取时拉丝较短,无溶血现象,菌落易聚集生长(适配成人样本高菌量与生物膜检测场景)。
生化与药敏特性:生化反应具物种特异性:氧化酶阳性、触酶阳性,发酵葡萄糖、麦芽糖产酸不产气,不发酵乳糖、蔗糖;核心优势在于成人感染适配药敏表型:对成人常用药物(左氧氟沙星、莫西沙星、阿莫西林 / 克拉维酸)敏感(左氧氟沙星 MIC 0.12-0.5μg/mL),对部分大环内酯类药物(红霉素)呈低水平耐药(MIC 2-4μg/mL,区别于儿童敏感株),药敏结果与成人慢性感染治疗响应匹配,是成人 NTHi 感染 AST 质控的可靠参照。
未开封状态:以冻干粉(真空包装,含 10^6-10^7 CFU / 支,含 X/V 因子与生物膜保护剂)或甘油菌悬液(20% 甘油,10^5 CFU/mL,-80℃专用)供应:
冻干粉:-20℃以下冷冻保存,长期(>6 个月)建议 - 80℃储存,严禁反复冻融(活菌率下降 70% 以上,破坏生物膜形成能力),保质期 3 年;
甘油菌:直接 - 80℃保存,室温暴露 20 分钟致活力下降 50%,保质期 2 年,解冻后一次性使用。
复苏后状态:复苏菌液(含 X/V 因子巧克力肉汤培养)2-8℃冷藏 5 天内使用;斜面培养物(含 X/V 因子巧克力琼脂斜面)2-8℃冷藏 2 周内传代,传代需 5% CO₂环境,使用前需镜检确认长球杆状形态,并通过大环内酯类药物药敏预实验验证低耐药特性。
复苏操作:生物安全柜内,冻干粉加 1mL 含 X/V 因子巧克力肉汤溶解,37℃ 5% CO₂培养 24-48 小时;待菌液浑浊、镜检见长球杆菌,且巧克力琼脂形成聚集性菌落时使用。
传代培养:挑取巧克力琼脂单菌落,划线接种新鲜平板,37℃ 5% CO₂培养 24-48 小时;斜面保存后 2-8℃冷藏,传代≤3 代(避免生物膜表型与药敏漂移),每次传代后需左氧氟沙星药敏测试验证敏感性。
应用操作:
成人质控:验证成人痰液、支气管肺泡灌洗液样本鉴定系统(质谱、PCR)对成人 NTHi 的检出准确性;
成人 AST 测试:校准左氧氟沙星、莫西沙星等药物 MIC 值,指导成人慢性 NTHi 感染用药;
慢性感染研究:用于成人 NTHi 生物膜形成机制研究,及成人抗慢性感染药物筛选;
试剂验证:验证成人流感嗜血杆菌检测试剂(如生物膜相关抗原试纸)的敏感性,适配成人慢性感染样本检测需求。


客服1