ATCC19424淋病奈瑟菌Neisseria gonorrhoeae

中文名称：淋病奈瑟菌

拉丁学名：Neisseria gonorrhoeae

标准编号：ATCC19424

产品形式：冻干菌体（含脱脂乳 - 谷氨酸 - 葡萄糖复合保护剂，维持苛养菌活性，复苏率≥75%）

安全等级：3 级（强致病性细菌，属法定乙类传染病病原体，主要通过性接触传播，可引起泌尿生殖系统化脓性感染，严重时引发盆腔炎、败血症、关节炎等并发症，需在生物安全三级实验室（BSL-3）或符合防护要求的 BSL-2 + 实验室严格按规范操作）

模式菌株：非模式菌株（是淋病奈瑟菌中生化特性稳定的代表性菌株，为临床淋病诊断、抗淋球菌药物敏感性试验及致病机制研究的核心参照菌株，尤其适用于传统生化鉴定与药敏质控）

分类地位：隶属于奈瑟菌科、奈瑟菌属，为革兰氏阴性双球菌，专性寄生于人类泌尿生殖系统黏膜，无动物宿主，是全球范围内高发的性传播疾病（STD）病原体之一，因引发淋病而得名，对青霉素类抗生素的耐药性已成为全球公共卫生挑战。

菌落形态：在巧克力琼脂培养基（含加热裂解红细胞，提供 X 因子）上 35-37℃（含 5% CO₂）培养 24-48h，菌落呈灰白色半透明，直径 0.5-1mm，表面光滑、凸起，边缘整齐，质地黏稠，易乳化（接种环挑取时呈拉丝状，是关键鉴别特征）；在血琼脂培养基上不溶血，菌落形态与巧克力琼脂相似但生长稍慢；

菌体形态：典型的革兰氏阴性双球菌，大小 0.6-0.8μm，呈 “咖啡豆” 状成对排列（两个球菌凹面相对），常存在于中性粒细胞胞内（感染标本特征）；无芽孢，无鞭毛，有菌毛（Ⅰ 型菌毛为主要黏附结构）与荚膜（部分菌株），革兰氏染色后呈红色双球菌，经美蓝染色可清晰观察到胞内寄生特性；电镜下可见细胞膜外的脂多糖（内毒素）与外膜蛋白（如 Por 蛋白、Opa 蛋白，参与黏附与免疫逃逸）。

苛养菌特性：专性需氧，依赖 5%-10% CO₂环境生长（模拟人体黏膜微环境），最适生长温度 35-37℃（低于 30℃或高于 38.5℃生长受抑制），生长 pH 范围 6.5-7.5（偏中性环境），营养需求苛刻，需 X 因子（血红素衍生物），无需 V 因子（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），可与脑膜炎奈瑟菌（需 X+V 因子）明确区分；

生化特性典型：氧化酶试验阳性（10 秒内快速呈深蓝色，奈瑟菌属核心鉴别特征），触酶试验阳性，不发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖（仅氧化葡萄糖产酸，与脑膜炎奈瑟菌 “氧化葡萄糖 + 麦芽糖” 特性明确区分），硝酸盐还原试验阴性，不产生吲哚；

致病性与耐药性：通过菌毛（Ⅰ 型）黏附泌尿生殖道上皮细胞，分泌外膜蛋白（Opa、Por）穿透黏膜屏障，释放内毒素引发化脓性炎症；临床常见感染类型包括男性尿道炎（尿频、尿急、尿痛、脓性分泌物）、女性宫颈炎（白带异常、宫颈充血），并发症包括附睾炎、盆腔炎、播散性淋球菌感染（DGI）；耐药性突出，全球范围内已出现青霉素耐药（PPNG）、四环素耐药（TRNG）及氟喹诺酮耐药菌株，对头孢曲松、大观霉素等药物的敏感性需通过药敏试验监测；

抗原特性：菌毛抗原与外膜蛋白抗原具有高度变异性，导致反复感染与疫苗研发困难。

培养条件：

推荐使用巧克力琼脂培养基或淋病奈瑟菌专用选择性培养基（添加万古霉素、多粘菌素 B 等，抑制杂菌生长），35-37℃（含 5% CO₂）培养 24-48h（CO₂浓度不足会导致菌落细小、生长缓慢）；

液体培养选用 GC 液体培养基（添加 X 因子与葡萄糖），35-37℃（含 5% CO₂）振荡培养（转速 100-120rpm，低速避免菌体破碎）36-48h，菌体浓度可达 10⁷-10⁸CFU/mL，菌液呈轻微浑浊状（因双球菌聚集成对，浑浊度低于分散生长的杆菌）；

关键培养要点：培养基需新鲜制备（X 因子易降解），培养环境需严格控制湿度（70%-80%），避免光照（紫外线会破坏菌体 DNA，导致活性下降），接种后需立即放入 CO₂培养箱，防止菌体暴露于空气过久。

活化步骤：

在 BSL-3 实验室生物安全柜内操作，无菌环境下开启冻干管，用 0.5-1mL 无菌 GC 液体培养基（预热至 37℃，含 5% CO₂平衡）充分溶解菌体；

将菌液全部涂布于巧克力琼脂平板，35-37℃（含 5% CO₂）培养 36h，挑取单个典型半透明菌落（优先选择边缘整齐、拉丝状明显的菌落），转接至新鲜巧克力琼脂斜面，35-37℃（含 5% CO₂）培养 24h，获得高活性纯培养物（操作时需穿戴正压防护服，避免气溶胶吸入，严格执行个人防护与废弃物消毒）。

保存方法：

未启封冻干菌体：-20℃以下密封避光保存，有效期 2 年（避免反复冻融，防止苛养菌活性不可逆下降）；

复苏后斜面菌种：4℃（含 5% CO₂）密封保存，每 3-5 天继代一次，有效期不超过 7 天（频繁继代易导致菌毛丢失与耐药性变化，每次继代后需验证氧化酶与葡萄糖发酵特性）；

长期保存：采用液氮冷冻保存（将对数生长期菌体与 15% 甘油 - 5% 葡萄糖混合液分装，投入液氮），有效期可达 1-2 年，解冻时需 37℃水浴快速融化，立即接种培养，避免菌体长时间暴露。

作为临床微生物实验室的淋病诊断质控菌株，用于验证淋病奈瑟菌检测方法（如革兰氏染色直接镜检、培养鉴定、核酸扩增试验（NAATs）、生化鉴定卡）的准确性，评估诊断试剂（如氧化酶试纸、淋病抗原检测试剂盒）的灵敏度与特异性；

用于临床分离株的比对分析，辅助确诊淋病病例，区分其他奈瑟菌（如脑膜炎奈瑟菌、黏膜奈瑟菌）引起的感染，符合 GB/T 18654-2002《临床实验室检测和体外诊断系统 感染性疾病的体外诊断测试系统》及 CLSI M100《抗微生物药物敏感性试验执行标准》中淋球菌药敏质控要求；

作为抗淋球菌药物敏感性试验（AST）的标准质控菌株，校准头孢曲松、大观霉素、阿奇霉素等一线药物的最小抑菌浓度（MIC）判定标准，监控临床菌株的耐药趋势。

用于体外抗淋球菌药物筛选，评估新型抗生素（如头孢菌素类衍生物、新型大环内酯类药物）对敏感菌株的抑制效果，筛选能破解耐药机制（如 β- 内酰胺酶、外排泵）的化合物；

作为耐药机制研究的模型菌株，探索青霉素结合蛋白（PBP2）突变、mtrR 外排泵基因表达与耐药性的关联，为耐药逆转剂研发提供靶点；

用于全球或区域淋球菌耐药监测网络（如 WHO 西太平洋地区耐药监测计划）的质量控制，确保不同实验室药敏结果的可比性。

用于淋病致病机制研究，探索菌毛黏附机制（如与上皮细胞 CD46 受体的结合）、外膜蛋白介导的免疫逃逸（如 Opa 蛋白与补体系统的相互作用），为疫苗研发提供理论基础（目前尚无有效淋病疫苗）；

用于性传播疾病防控研究，评估安全套使用、伴侣治疗等干预措施对淋球菌传播的阻断效果，为公共卫生部门制定淋病防控策略提供数据支撑；

作为分子流行病学研究的参照菌株，通过 MLST（多位点序列分型）、Por 蛋白基因分型等方法，分析不同地区淋球菌流行菌株的遗传特征与传播路径。

用于高等医学院校微生物学（医学微生物方向）教学实验（需严格防护），演示苛养菌培养技术、革兰氏阴性双球菌形态鉴别、氧化酶试验等，帮助学生掌握淋病奈瑟菌的关键鉴别要点与危害防控知识；

作为临床实验室能力验证（PT）的样本菌株，评估实验室对淋病奈瑟菌的检测与药敏能力，确保临床诊断结果的准确性。

质量检测：

纯度检测：涂布巧克力琼脂、血琼脂及麦康凯培养基（确认不生长，排除肠杆菌科杂菌），确保无细菌、真菌污染，菌落形态均一，革兰氏染色仅见阴性双球菌，且无胞外杂菌；

活性检测：平板计数法测定活菌数，确保≥10⁷CFU / 支；35-37℃（含 5% CO₂）培养 24h 后，菌落直径可达 0.5mm 以上，菌体浓度≥10⁷CFU/mL；

特性验证：通过 API NH 生化鉴定卡（氧化酶阳性、仅氧化葡萄糖产酸、无 V 因子需求）、16S rRNA 基因测序确认分类地位，采用 CLSI 纸片扩散法或肉汤稀释法检测药敏表型（对头孢曲松敏感、对青霉素耐药）；

安全性检测：内毒素检测（鲎试剂法≤5EU/mL），确认无外源性毒素污染；

随货附带完整 COA（分析报告），质量可追溯，需提供国家认可的生物安全证书与病原体运输许可。

安全操作规范：

操作需在 BSL-3 实验室或 BSL-2 + 实验室（配备生物安全柜、正压防护服、负压通风系统）进行，实验人员需经高致病性微生物操作培训并考核合格，全程穿戴正压防护服、护目镜、N95 口罩及双层无菌手套；

实验废弃物（含菌培养基、耗材、防护用品）需经 121℃高压蒸汽灭菌 60min（确保彻底灭活）后，按医疗废弃物规范处理；

若发生菌液泄漏，立即启动应急方案：封闭污染区域，用 2000mg/L 含氯消毒剂覆盖污染表面并作用 60 分钟，通风 1 小时以上，暴露人员需立即进行医学评估，必要时服用预防性抗生素（如头孢曲松），并随访观察 7-14 天；

收货后 24 小时内，若发现安瓿管破损、菌体变色（非淡黄色）、复苏后菌落形态异常或生化特性不匹配（如发酵麦芽糖），需在生物安全柜内妥善处理破损品，并按高致病性微生物运输规范联系售后，严禁私自处置。