ATCC31426淋病奈瑟菌Neisseria gonorrhoeae

中文名称：淋病奈瑟菌

拉丁学名：Neisseria gonorrhoeae

标准编号：ATCC31426

产品形式：冻干菌体（含脱脂乳 - 谷氨酸 - 葡萄糖 - 维生素 B12 复合保护剂，优化苛养菌活性维持，针对耐药菌株特性提升复苏稳定性，复苏率≥75%）

安全等级：3 级（强致病性细菌，属法定乙类传染病病原体，主要通过性接触传播，可引发泌尿生殖系统化脓性感染及盆腔炎、败血症等严重并发症，因携带特定耐药基因，临床治疗难度高于普通菌株，需在生物安全三级实验室（BSL-3）或符合防护要求的 BSL-2 + 实验室严格按规范操作）

模式菌株：非模式菌株（是淋病奈瑟菌中多重耐药特性明确的代表性菌株，携带 β- 内酰胺酶基因及外排泵耐药基因，为临床多重耐药淋球菌诊断、抗耐药药物筛选及耐药机制研究的核心参照菌株，尤其适用于分子耐药检测与药敏质控）

分类地位：隶属于奈瑟菌科、奈瑟菌属，为革兰氏阴性双球菌，专性寄生于人类泌尿生殖系统黏膜，无动物宿主，是全球高发的性传播疾病病原体之一；因该菌株对青霉素、四环素、氟喹诺酮类药物均表现耐药，且对部分头孢类药物敏感性下降，成为研究淋球菌耐药进化与临床治疗策略调整的重要材料。

菌落形态：在巧克力琼脂培养基（含 X 因子）上 35-37℃（含 5% CO₂）培养 24-48h，菌落呈灰白色半透明，直径 0.4-0.8mm（较 ATCC19424 略小，耐药菌株生长速率稍慢），表面光滑、凸起，边缘整齐，质地黏稠，接种环挑取时呈明显拉丝状（关键鉴别特征）；在含头孢曲松的选择性培养基上可缓慢生长（表现出对头孢类药物的低水平耐药，与敏感菌株的抑制生长形成差异）；

菌体形态：典型革兰氏阴性双球菌，大小 0.6-0.8μm，呈 “咖啡豆” 状成对排列（凹面相对），更易观察到胞外黏液层（与耐药相关的外膜蛋白表达增强）；无芽孢，无鞭毛，Ⅰ 型菌毛完整（黏附能力与敏感菌株无显著差异），部分菌体可观察到荚膜增厚；革兰氏染色呈红色双球菌，美蓝染色可见中性粒细胞胞内寄生特性，电镜下外膜蛋白（PorB、Opa）分布密度高于普通敏感菌株，脂多糖（内毒素）结构无显著变异。

苛养菌特性：专性需氧，依赖 5%-10% CO₂环境生长，最适生长温度 35-37℃（低于 30℃或高于 38.5℃生长受抑制更明显），生长 pH 范围 6.5-7.5，营养需求苛刻，需 X 因子（血红素衍生物），无需 V 因子，可与脑膜炎奈瑟菌明确区分；

生化特性典型：氧化酶试验阳性（10 秒内快速呈深蓝色），触酶试验阳性，仅氧化葡萄糖产酸（不发酵麦芽糖、乳糖、蔗糖，与脑膜炎奈瑟菌差异显著），硝酸盐还原试验阴性，不产生吲哚；与 ATCC19424 相比，该菌株在含低浓度抗生素（如青霉素 5μg/mL）的培养基中仍可缓慢生长，生化反应速率无显著差异；

致病性与耐药性（菌株核心特性）：

致病性：通过 Ⅰ 型菌毛黏附泌尿生殖道上皮细胞，分泌 Opa 蛋白穿透黏膜屏障，释放内毒素引发化脓性炎症，临床感染症状与敏感菌株一致（男性尿道炎、女性宫颈炎等），但因耐药导致感染持续时间更长，并发症发生率更高；

耐药特性：明确携带多重耐药基因—— 含青霉素酶基因（blaTEM，导致青霉素耐药）、四环素耐药基因（tetM，导致四环素耐药）、氟喹诺酮耐药基因（gyrA突变，导致环丙沙星耐药），同时携带 mtrR 外排泵基因高表达突变（增强对头孢曲松、大观霉素的耐药性）；药敏试验结果显示：对青霉素、四环素、环丙沙星耐药，对头孢曲松中介（MIC 值 0.125-0.25μg/mL，高于敏感菌株的≤0.06μg/mL），对大观霉素敏感；

抗原特性：菌毛抗原与外膜蛋白抗原（PorB、Opa）变异度高于普通菌株，更易逃避宿主免疫应答，导致反复感染风险增加。

培养条件：

推荐使用巧克力琼脂培养基或耐药淋球菌专用选择性培养基（添加青霉素 5μg/mL、四环素 2μg/mL，筛选耐药菌落），35-37℃（含 5% CO₂）培养 30-48h（耐药菌株生长周期较敏感菌株长 6-12h，需延长培养时间）；

液体培养选用 GC 液体培养基（添加 X 因子、葡萄糖及 0.1% 酵母提取物，优化耐药菌株营养供给），35-37℃（含 5% CO₂）振荡培养（转速 100-120rpm，低速避免菌体破碎）40-48h，菌体浓度可达 10⁷-10⁸CFU/mL，菌液呈轻微浑浊状（因耐药菌株聚集成对能力更强，浑浊度略低于敏感菌株）；

关键培养要点：培养基需新鲜制备（X 因子与酵母提取物易降解，影响耐药菌株生长），培养环境湿度控制在 75%-85%（高于普通菌株需求，防止菌落干裂），避免光照（紫外线易导致耐药基因稳定性下降），接种量需比敏感菌株增加 20%（确保复苏效率）。

活化步骤：

在 BSL-3 实验室生物安全柜内操作，无菌环境下开启冻干管，用 0.5-1mL 无菌 GC 液体培养基（预热至 37℃，含 5% CO₂平衡 30 分钟）充分溶解菌体；

将菌液全部涂布于耐药淋球菌专用选择性培养基，35-37℃（含 5% CO₂）培养 36h，挑取单个典型半透明菌落（优先选择拉丝状明显、在选择性培养基上生长良好的菌落），转接至新鲜巧克力琼脂斜面，35-37℃（含 5% CO₂）培养 24h，获得高活性纯培养物（操作时需穿戴正压防护服，严格控制气溶胶产生，耐药菌株传播风险与敏感菌株一致，但治疗难度更高）。

保存方法：

未启封冻干菌体：-20℃以下密封避光保存，有效期 2 年（因耐药基因易发生突变，需避免反复冻融，建议分装置于 - 80℃保存以延长稳定性）；

复苏后斜面菌种：4℃（含 5% CO₂）密封保存，每 3 天继代一次，有效期不超过 5 天（耐药菌株继代过程中耐药基因易丢失，需缩短继代周期并每次验证药敏特性）；

长期保存：采用液氮冷冻保存（将对数生长期菌体与 15% 甘油 - 5% 葡萄糖 - 0.5% 维生素 C 混合液分装，维生素 C 可保护耐药基因稳定性），投入液氮后有效期可达 1-2 年，解冻时需 37℃水浴快速融化，立即接种至选择性培养基，避免耐药表型退化。

作为临床微生物实验室多重耐药淋球菌检测的标准参照菌株，用于验证耐药检测方法（如 PCR 耐药基因检测、质谱耐药表型分析、肉汤稀释法 MIC 测定）的准确性，评估耐药诊断试剂（如 β- 内酰胺酶检测试纸、耐药基因芯片）的灵敏度与特异性；

用于临床分离株的耐药比对分析，辅助确诊多重耐药淋球菌感染病例，区分普通敏感菌株与耐药菌株，为临床选择头孢曲松联合大观霉素等治疗方案提供依据，符合 CLSI M100《抗微生物药物敏感性试验执行标准》中耐药淋球菌质控要求；

作为抗耐药淋球菌药物药敏试验的质控菌株，校准头孢曲松、大观霉素、阿奇霉素等药物的 MIC 判定标准，监控临床菌株耐药趋势变化（如头孢曲松敏感性进一步下降）。

用于体外抗耐药淋球菌药物筛选，评估新型抗生素（如头孢他啶 - 阿维巴坦复方制剂、新型大环内酯类药物）对多重耐药菌株的抑制效果，筛选能破解 β- 内酰胺酶与外排泵耐药机制的化合物；

作为耐药机制研究的模型菌株，探索mtrR外排泵基因表达调控、gyrA基因突变对氟喹诺酮类药物结合能力的影响，以及耐药基因水平转移机制（如质粒介导的tetM基因传播），为耐药逆转剂（如外排泵抑制剂）研发提供靶点；

用于抗耐药药物作用机制验证，通过测定药物对菌株外膜蛋白合成、β- 内酰胺酶活性的影响，明确药物是否针对耐药靶点起效。

作为分子流行病学研究的参照菌株，通过 MLST（多位点序列分型）、PorB 基因分型、耐药基因测序等方法，分析全球不同地区多重耐药淋球菌的遗传进化关系，追溯耐药菌株传播路径（如跨区域流行菌株的关联）；

用于公共卫生防控策略研究，评估针对耐药菌株的干预措施（如加强性传播疾病筛查、推广敏感药物联合治疗）对耐药菌株流行率的影响，为制定区域耐药防控方案提供数据支撑；

用于耐药基因数据库构建，其耐药基因序列可作为临床分子检测的标准参考序列，提升耐药检测结果的准确性与可比性。

用于高等医学院校医学微生物学（耐药微生物方向）教学实验（需严格防护），演示多重耐药苛养菌培养技术、耐药菌株药敏试验方法、耐药基因检测原理，帮助学生理解淋球菌耐药进化与临床治疗挑战；

作为临床实验室能力验证（PT）的样本菌株，评估实验室对多重耐药淋球菌的检测与药敏能力（尤其针对低水平头孢曲松耐药的识别），确保临床对耐药菌株的及时诊断与正确治疗。

质量检测：

纯度检测：涂布巧克力琼脂、耐药选择性培养基及麦康凯培养基（确认不生长），确保无细菌、真菌污染，菌落形态均一，革兰氏染色仅见阴性双球菌，无胞外杂菌；

活性检测：平板计数法测定活菌数，确保≥10⁷CFU / 支；35-37℃（含 5% CO₂）培养 48h 后，耐药选择性培养基上菌落直径≥0.4mm，菌体浓度≥10⁷CFU/mL；

特性验证：

生化验证：API NH 生化鉴定卡确认氧化酶阳性、仅氧化葡萄糖产酸；

耐药特性验证：采用 CLSI 肉汤稀释法检测药敏表型，确认对青霉素（MIC≥8μg/mL）、四环素（MIC≥16μg/mL）、环丙沙星（MIC≥4μg/mL）耐药，对头孢曲松中介（MIC 0.125-0.25μg/mL）；

分子验证：PCR 检测确认blaTEM、tetM、gyrA突变基因阳性，16S rRNA 基因测序确认分类地位；

安全性检测：内毒素检测（鲎试剂法≤5EU/mL），确认无外源性毒素污染；

随货附带完整 COA（分析报告），含详细耐药基因序列与药敏谱数据，质量可追溯，需提供国家认可的生物安全证书与高致病性耐药微生物运输许可。

安全操作规范：

操作需在 BSL-3 实验室或 BSL-2 + 实验室（配备生物安全柜、正压防护服、负压通风系统、高效空气过滤器）进行，实验人员需经高致病性耐药微生物操作专项培训并考核合格，全程穿戴正压防护服、护目镜、N95 口罩及双层无菌手套；

实验废弃物（含菌培养基、耗材、防护用品）需经 121℃高压蒸汽灭菌 90min（耐药菌株细胞壁结构更稳定，延长灭菌时间确保彻底灭活）后，按医疗废弃物规范处理；

若发生菌液泄漏，立即启动应急方案：封闭污染区域，用 2000mg/L 含氯消毒剂与 0.5% 过氧乙酸混合液覆盖污染表面并作用 90 分钟，通风 2 小时以上，暴露人员需立即进行医学评估，服用头孢曲松 + 大观霉素联合预防性药物，并随访观察 14 天；

收货后 24 小时内，若发现安瓿管破损、菌体变色（非淡黄色）、复苏后在耐药选择性培养基上不生长或药敏特性与 COA 报告不符，需在生物安全柜内妥善处理破损品，按高致病性耐药微生物运输规范联系售后，严禁私自处置或丢弃。