形态:革兰氏阴性短杆菌,显微镜下呈直杆状,两端钝圆,大小约 0.4-0.7μm×0.9-1.8μm,无芽孢,具周生鞭毛(2-4 根),可自主运动(显微镜下呈 “缓慢穿梭样” 运动,运动性较 ATCC27857 略弱)。在普通营养琼脂上形成直径 0.9-2.2mm 的淡红色至深红色菌落,质地湿润、表面光滑且具明显黏性(挑取时可拉成细丝,“粘质” 特性显著),边缘整齐或轻微不规则;在麦康凯培养基上呈红色菌落(能发酵乳糖产酸,与非发酵菌无色菌落明确区分);在血琼脂培养基上均表现为 γ- 溶血(不溶血),无 α 或 β 溶血现象;色素生成具温度依赖性,22-28℃培养时色素合成量最高,37℃培养时色素生成受抑制(菌落呈乳白色,转移至 25℃培养 24 小时后可恢复红色),此特性是该菌株重要鉴别标志。
生理生化:兼性厌氧微生物,最适生长温度 22-28℃(色素合成最优温度)、35-37℃(临床感染模拟研究适配温度),最适 pH 值 6.4-7.6,对营养要求低,在普通营养琼脂、LB 培养基、TSB 培养基中均可快速生长,能耐受低营养环境(如含 0.04% 碳源的基础培养基)及一定浓度胆盐(可在含 0.1% 胆盐的培养基中生长)。生化反应中,氧化酶试验阴性(肠杆菌科典型特征),触酶试验阳性,硝酸盐还原试验阳性(可将硝酸盐还原为亚硝酸盐或氮气),吲哚试验阴性,甲基红试验阴性,VP 试验阳性(产乙酰甲基甲醇),柠檬酸盐利用试验阳性(能以柠檬酸盐为唯一碳源),尿素酶试验阴性;糖类发酵方面,可发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖(产酸产气),不发酵阿拉伯糖、木糖、鼠李糖;毒力特性上,携带生物膜形成相关基因(如 bssS、bssR)及胞外酶合成基因(蛋白酶基因 prtA、脂肪酶基因 lipA),具中等生物膜黏附能力(易附着于塑料、玻璃表面),对免疫功能低下人群(如老年人、肿瘤患者)易引发尿路感染、伤口感染等条件性感染,是医院环境及自然环境中常见的机会致病菌。
培养基:常规培养(色素观察)优先选用营养琼脂或 LB 培养基(22-28℃培养 48 小时,确保色素充分生成);临床感染相关研究选用 TSB 培养基(35-37℃培养,模拟人体生理环境);药物敏感性试验需采用 MH 培养基(符合 CLSI 标准,保证药敏结果准确性与重复性);生物膜研究可选用聚苯乙烯微孔板或玻璃培养皿(利于生物膜附着与观察);环境样本分离可选用含 0.05% 胆盐的营养琼脂(抑制部分杂菌生长)。
操作:固体培养(色素观察)置于 22-28℃恒温培养箱静置 48 小时,可形成深红色黏性单菌落;临床相关培养(35-37℃)静置 18-24 小时,菌落呈乳白色,菌体量达峰值;液体培养(色素研究)采用 22-28℃、140-160rpm 摇床振荡培养 24-36 小时,菌液呈红色浑浊状(色素溶于培养基),菌浓度可达 10⁸-10⁹CFU/mL;生物膜培养需静置培养 48 小时(避免振荡破坏生物膜结构,影响研究结果)。传代次数建议控制在 5 代以内,温度波动需≤±1℃,避免因传代过多或温度异常导致色素合成基因失活、生物膜形成能力减弱或生化特性改变。
短期(1-2 周):取 22-28℃培养 48 小时的纯培养菌株(需确认红色色素与黏性特征),接种至营养琼脂斜面培养基,25℃培养 24 小时后,密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3 天观察一次菌株状态,若发现菌落干燥、污染、色素褪色或黏性减弱,需及时重新接种(优先在 22-28℃条件下复壮),防止菌株失活或特性改变。
长期(3 年以上):推荐两种高效保存方法:①冷冻干燥保存法:取 22-28℃培养 24 小时的对数生长期菌液(OD600=0.6-0.8,此时菌体活性高、色素合成初期),与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 蔗糖(保护色素合成相关酶及菌体结构)的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀,分装至无菌冷冻管(每管 0.5mL),经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥,干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存,保存期限可达 5-7 年,复苏后色素生成能力保留率≥88%、生化特性无明显变化;②甘油冷冻保存法:将对数生长期菌液与无菌甘油(终浓度 20%)混合均匀,分装至无菌冷冻管(每管 1mL),直接放入 - 80℃冰箱保存,保存期限 3-5 年,操作简便(复苏时需将菌株接种至营养琼脂,22-28℃培养 24-48 小时复壮,恢复色素合成与黏性特征)。长期保存需每 12 个月复苏一次,复苏后通过革兰氏染色(确认形态与染色特性)、色素生成试验(22-28℃培养)、VP 试验、生物膜形成能力检测及生化反应验证,全面确认菌株纯度、生理活性与核心特性,确保后续实验使用效果。


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