形态：革兰氏阳性球菌，显微镜下呈中长链状排列（多为 5-8 个菌体组成链，少数可达 10 个以上，链长介于牛链球菌的短链与无乳链球菌的长链之间），无芽孢与鞭毛，多数菌株表面具厚荚膜（经印度墨汁负染清晰可见，荚膜厚度大于牛链球菌的无荚膜状态），大小约 0.7-1.1μm。在普通营养琼脂上生长较弱，形成直径 0.6-1.2mm 的灰白色半透明菌落，质地柔软、表面光滑凸起，边缘整齐；在血琼脂培养基上表现为强 β- 溶血（菌落周围形成 3-4mm 宽透明溶血环，溶血活性强于牛链球菌的 α- 溶血，与无乳链球菌的 β- 溶血强度相当但抗原群不同）；在麦康凯培养基上不生长（与革兰氏阴性肠道菌区分）；在 C 群链球菌选择性培养基（含多粘菌素 B、萘啶酸）上可优势生长（抑制杂菌，辅助鉴别），此中长链排列、C 群抗原阳性是关键鉴别标志。
生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 37-38℃（更适配马体温，30-40℃范围内均可生长），最适 pH 值 7.2-7.6，对营养要求较高，需在含血清或血液的培养基中生长良好（普通营养琼脂上生长缓慢，与牛链球菌的中等营养需求区分）。生化反应中，触酶试验阴性（链球菌属共性，与葡萄球菌区分），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，VP 试验阳性（与牛链球菌的 VP 阴性区分）；关键生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖（均产酸不产气），不发酵甘露醇、阿拉伯糖，胆汁七叶苷试验阴性（与牛链球菌的阳性结果明确区分，核心鉴别点）；毒力特性上，携带跨宿主感染相关毒力基因（如荚膜多糖基因 epf、溶血素基因 sla、黏附素基因 fnBp），对马呼吸道上皮细胞、牛乳腺上皮细胞及人类皮肤黏膜细胞黏附能力极强，动物中引发马传染性支气管炎、牛乳腺炎、猪败血症，人类中多因接触病畜引发皮肤软组织感染、肺炎，偶发败血症，是人兽共患病高风险菌株（风险高于牛链球菌）。
培养基：常规培养优先选用血琼脂培养基或含 10% 马血清的 LB 培养基（37-38℃培养 24-30 小时，满足营养需求）；马源样本（如鼻腔拭子、流产胎儿组织）分离推荐使用 C 群链球菌选择性培养基（抑制杂菌，提升检出率）；家畜乳腺样本分离可选用含乳腺上皮细胞提取物的血清培养基（模拟感染环境）；药物敏感性试验需采用 MH 血琼脂培养基（需加血，与牛链球菌的 MH 琼脂区分，符合 CLSI 兽医标准）；生化鉴别需使用胆汁七叶苷培养基（验证阴性反应）。
操作：固体培养置于 37-38℃、含 5% CO₂的恒温培养箱（CO₂促进荚膜形成与溶血活性，与牛链球菌的无需 CO₂区分）静置 24-30 小时，可形成形态典型的单菌落（血琼脂上重点观察强 β- 溶血环与中长链排列）；液体培养采用 37-38℃、150-180rpm 摇床振荡培养 20-24 小时（振荡速率与牛链球菌相当，避免链状过度断裂），培养后期菌液呈均匀浑浊状（含血清时浊度高），菌浓度可达 10⁸-10⁹CFU/mL，且能最大程度保留跨宿主黏附能力与毒力活性。传代次数建议控制在 4 代以内（少于牛链球菌的 5 代），温度波动需≤±1℃，避免因传代过多导致溶血活性减弱或荚膜丢失。
短期（1-2 周）：取 37-38℃培养 24 小时的纯培养菌株（需确认强 β- 溶血、C 群抗原阳性、胆汁七叶苷阴性），接种至含马血清的营养琼脂斜面培养基，37℃培养 18 小时后，密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 2-3 天观察一次菌株状态（观察频率高于牛链球菌），若发现菌落干燥、污染、溶血环变窄，需及时重新接种（37-38℃、CO₂环境复壮），防止菌株因营养不足失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.7-0.9，培养 24 小时，含马血清培养基），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 5% 马血清（保护荚膜与毒力蛋白）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-7 年，复苏后强 β- 溶血活性与跨宿主黏附能力保留率≥95%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 25%，高于牛链球菌的 20%，增强抗冻性）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-4 年，操作简便（复苏时需接种至血琼脂与胆汁七叶苷双培养基，同时验证核心特性）。长期保存需每 10 个月复苏一次（复苏频率高于牛链球菌），复苏后通过革兰氏染色（确认中长链排列）、溶血试验、C 群抗原检测、胆汁七叶苷试验及跨宿主细胞黏附试验，全面确认菌株纯度、生理活性与致病特性，确保后续实验使用效果。
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ATCC 29213 金黄色葡萄球菌 ｜ ATCC 8739 大肠杆菌 ｜ ATCC 6538 金黄色葡萄球菌
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