形态：革兰氏阳性球菌，显微镜下呈短链状排列（多为 2-4 个菌体组成短链，偶见 5-6 个菌体的中链，链长短于马链球菌兽疫亚种的中长链），无芽孢与鞭毛，部分菌株表面具薄荚膜（经荚膜染色可见，荚膜厚度薄于马链球菌兽疫亚种的厚荚膜），大小约 0.5-0.8μm。在普通营养琼脂上生长缓慢，形成直径 0.3-0.8mm 的乳白色不透明菌落，质地致密、表面粗糙（因合成葡聚糖，与马链球菌兽疫亚种的光滑菌落区分），边缘不规则；在血琼脂培养基上表现为 α- 溶血（菌落周围形成 1-2mm 宽草绿色溶血环，与马链球菌兽疫亚种的强 β- 溶血明确区分）；在麦康凯培养基上不生长（与革兰氏阴性肠道菌区分）；在变形链球菌选择性培养基（含蔗糖、杆菌肽、氯化三苯四氮唑）上可形成黑色菌落（因产酸使指示剂变色，辅助鉴别），此短链排列、粗糙菌落、α- 溶血是关键鉴别标志。
生理生化：兼性厌氧微生物，最适生长温度 35-37℃（适配人体口腔温度，30-40℃范围内均可生长），最适 pH 值 6.0-7.0（耐酸性强，可在 pH4.5-5.0 环境中生长，与马链球菌兽疫亚种的中性 pH 适应区分），对营养要求中等，在含蔗糖的培养基中生长更旺盛（蔗糖为葡聚糖合成底物）。生化反应中，触酶试验阴性（链球菌属共性，与葡萄球菌区分），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性，VP 试验阴性（与马链球菌兽疫亚种的 VP 阳性区分）；关键生化特性为发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖（均产酸能力强，蔗糖发酵时同步合成水溶性与水不溶性葡聚糖），不发酵甘露醇、阿拉伯糖，胆汁七叶苷试验阴性（与牛链球菌的阳性结果区分，与马链球菌兽疫亚种一致）；毒力特性上，携带致龋相关毒力基因（如葡聚糖转移酶基因 gtfB、gtfC，酸耐受基因 atpD，黏附素基因 spaP），对牙齿表面釉质的黏附能力极强（通过葡聚糖形成生物膜，即牙菌斑），代谢糖类产生大量乳酸（降低牙面 pH，导致牙釉质脱矿），仅引发人类龋病（无动物致病性与跨宿主感染风险，与马链球菌兽疫亚种的人兽共患特性明确区分）。
培养基：常规培养优先选用含 5% 蔗糖的 BHI 培养基（脑心浸液培养基，35-37℃培养 48-72 小时，促进葡聚糖合成与菌落形态形成）；口腔样本（如牙菌斑、唾液）分离推荐使用变形链球菌选择性培养基（抑制杂菌，提升检出率）；致龋机制研究需使用含不同浓度蔗糖的培养基（分析葡聚糖合成量与致龋活性关联）；药物敏感性试验需采用 MH 琼脂培养基（无需加血，与马链球菌兽疫亚种的 MH 血琼脂区分，符合 CLSI 口腔微生物标准）；耐酸性检测需使用 pH 梯度培养基（验证 pH4.5 环境下的生长能力）。
操作：固体培养置于 35-37℃、含 5% CO₂的恒温培养箱（CO₂促进菌体黏附与生物膜形成，与马链球菌兽疫亚种的 CO₂需求一致）静置 48-72 小时，可形成形态典型的粗糙黑色单菌落（选择性培养基上重点观察颜色与菌落质地）；液体培养采用 35-37℃、120-150rpm 摇床振荡培养 36-48 小时（振荡速率低于马链球菌兽疫亚种，避免破坏葡聚糖结构），培养后期菌液呈浑浊状且含黏性沉淀（葡聚糖），菌浓度可达 10⁸-10⁹CFU/mL，且能最大程度保留致龋活性（产酸与黏附能力）。传代次数建议控制在 5 代以内，温度波动需≤±1℃，避免因传代过多导致葡聚糖合成能力减弱或耐酸性下降。
短期（1-2 周）：取 35-37℃培养 48 小时的纯培养菌株（需确认 α- 溶血、粗糙菌落、蔗糖发酵产黏），接种至含 5% 蔗糖的 BHI 琼脂斜面培养基，35℃培养 24 小时后，密封斜面管口置于 4℃冰箱冷藏保存。每 3-4 天观察一次菌株状态，若发现菌落干燥、污染、黏性减弱，需及时重新接种（35-37℃、CO₂环境复壮），防止菌株因蔗糖不足导致致龋特性改变。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（OD600=0.6-0.8，培养 36 小时，含蔗糖 BHI 培养基），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 2% 蔗糖（保护葡聚糖合成酶活性与耐酸基因）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL），经 - 20℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 8 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后置于 - 80℃冰箱保存，保存期限可达 5-7 年，复苏后致龋活性（产酸、黏附）保留率≥95%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与无菌甘油（终浓度 20%，与马链球菌兽疫亚种的 25% 区分）混合均匀，分装至无菌冷冻管（每管 1mL），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-5 年，操作简便（复苏时需接种至含蔗糖 BHI 培养基与选择性培养基，同时验证核心特性）。长期保存需每 12 个月复苏一次，复苏后通过革兰氏染色（确认短链排列）、溶血试验、蔗糖发酵试验、耐酸性检测及牙面黏附试验，全面确认菌株纯度、生理活性与致龋特性，确保后续实验使用效果。
客服1