形态：革兰氏阴性杆菌，显微镜下呈细长弯曲杆状或梭状（大小约 0.5-0.8μm×2.0-5.0μm，与红色毛癣菌的丝状真菌形态完全不同），无芽孢与鞭毛（无运动性，与部分肠道细菌区分），细胞壁含独特脂多糖（LPS，致炎关键成分），经吉姆萨染色呈淡紫色，两端染色略深（呈 “两极浓染” 特征，与红色毛癣菌的菌丝孢子染色差异显著）。在 CDC 厌氧血琼脂培养基上生长缓慢，形成直径 0.5-1.0mm 的灰白色半透明菌落（培养 5-7 天），菌落表面光滑、边缘整齐，质地柔软且具黏性（挑取时可拉成细丝，与红色毛癣菌的绒毛状菌落明确区分）；在含维生素 K₁与氯化血红素的厌氧培养基上生长更旺盛（需特殊生长因子，与红色毛癣菌的基础营养需求区分）；不产生扩散性色素（与红色毛癣菌的红色色素扩散特性区分），在需氧环境中完全不生长（专性厌氧标志，与红色毛癣菌的需氧特性完全相反），此细长弯曲杆状、两极浓染、厌氧生长是关键鉴别标志。
生理生化：专性厌氧微生物（与红色毛癣菌的需氧特性明确区分），最适生长温度 35-37℃（适配人体口腔温度，与红色毛癣菌的 25-30℃偏好区分），最适 pH 值 7.0-7.4（中性环境，与红色毛癣菌的偏酸性适应区分），对营养要求苛刻，需在含血液、维生素 K₁、氯化血红素的复杂培养基中生长（依赖外源生长因子，与红色毛癣菌的中等营养需求区分）。生化反应中，触酶试验阴性（与红色毛癣菌的无细菌类生化试验特性不同），氧化酶试验阴性，硝酸盐还原试验阴性；关键生理特性为：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等常见糖类（代谢模式以分解蛋白质为主，与红色毛癣菌的碳水化合物代谢区分），可分解明胶、酪蛋白（产蛋白酶，降解牙周组织蛋白），吲哚试验阳性（产生吲哚，辅助鉴别），尿素酶试验阴性；毒力特性上，携带牙周致病相关基因（如蛋白酶基因 prtH、脂多糖基因 lpxA、黏附素基因 bfpA），对牙周上皮细胞与结缔组织细胞黏附能力极强，通过分泌蛋白酶（降解胶原纤维）与 LPS（引发炎症反应）破坏牙周组织，仅引发人类牙周疾病（无皮肤感染能力，与红色毛癣菌的皮肤致病特性区分），且常与牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体形成协同感染，加剧牙周炎进展。
培养基：常规培养优先选用 CDC 厌氧血琼脂培养基（含 5% 绵羊血、维生素 K₁、氯化血红素，35-37℃厌氧培养 5-7 天，与红色毛癣菌的 SDA 培养基区分）；口腔样本（如牙周袋拭子、龈下菌斑）分离需使用厌氧转运管（避免暴露于空气，与红色毛癣菌的常规样本处理区分），并搭配预还原厌氧血琼脂培养基（PRAS 培养基，去除培养基中氧气，提升检出率）；药物敏感性试验需采用厌氧 MH 血琼脂培养基（含维生素 K₁与氯化血红素，符合 CLSI 厌氧菌药敏标准，与红色毛癣菌的 RPMI 1640 培养基区分）；致病机制研究需使用含牙周膜成纤维细胞的共培养体系（模拟牙周组织环境，需维持厌氧条件）。
操作：固体培养需置于 35-37℃、含 85% N₂+10% H₂+5% CO₂的厌氧培养箱（严格厌氧环境，与红色毛癣菌的需氧培养箱完全不同）静置 5-7 天（培养周期长于红色毛癣菌的 14-21 天），定期观察菌落形态（避免过早判定无菌生长）；液体培养采用 35-37℃、厌氧环境下静态培养 7-10 天（无需振荡，防止氧气进入，与红色毛癣菌的摇床振荡培养区分），培养后期菌液呈轻微浑浊状（含菌体与代谢产物），菌浓度以 CFU/mL 计量（10⁶-10⁷CFU/mL，低于红色毛癣菌的孢子浓度），且能最大程度保留牙周组织黏附与蛋白酶分泌能力。传代次数建议控制在 4 代以内（少于红色毛癣菌的 3 代），传代过程需全程维持厌氧环境（使用厌氧工作站），避免氧气暴露导致菌体失活，温度波动需≤±1℃。
短期（1-2 周）：取厌氧培养 5-7 天的纯培养菌株（需确认革兰氏阴性、细长弯曲杆状、吲哚阳性），接种至预还原厌氧血琼脂斜面培养基，35-37℃厌氧培养 48 小时后，密封斜面管口（充入氮气置换空气）置于 4℃冰箱冷藏保存（与红色毛癣菌的常规冷藏区分，需隔绝氧气）。每 3-4 天观察一次菌株状态，若发现菌落干燥、污染或暴露于空气后变色，需及时在厌氧环境下重新接种复壮，防止菌株因有氧暴露失活。
长期（3 年以上）：推荐两种高效保存方法（需适配厌氧菌特性，与红色毛癣菌差异显著）：①冷冻干燥保存法：取对数生长期菌液（厌氧培养 7 天，用预还原生理盐水洗脱），与含 10% 脱脂乳 + 0.5% 酵母提取物 + 0.1% 半胱氨酸（还原剂，维持厌氧状态）的复合保护剂按 1:1 体积比充分混匀，分装至无菌冷冻管（每管 0.5mL，充氮除氧），经 - 40℃预冻 4 小时、-80℃冷冻 12 小时梯度降温后进行冷冻干燥，干燥完成后充氮密封置于 - 80℃冰箱保存（与红色毛癣菌的 - 20℃保存区分），保存期限可达 5-6 年，复苏后菌体存活率≥80%；②甘油冷冻保存法：将对数生长期菌液与预还原无菌甘油（终浓度 20%，含 0.1% 半胱氨酸）混合均匀，分装至无菌冷冻管（充氮除氧），直接放入 - 80℃冰箱保存，保存期限 3-4 年，操作简便（复苏时需在厌氧环境下接种至 CDC 厌氧血琼脂培养基）。长期保存需每 12 个月复苏一次（复苏周期短于红色毛癣菌的 18-24 个月），复苏后通过革兰氏染色（确认形态）、厌氧生长试验、吲哚试验及牙周细胞黏附试验，全面确认菌株纯度、生理活性与致病特性，确保后续实验使用效果。
客服1