引言
毒株到货后的处理方式，直接影响后续扩增的成败。收到 ATCC 病毒株后，第一步是确认毒株以哪种形式运输：冷冻保存形式的毒株应立即解冻接种，或短暂储存于 -70℃ 至 -80℃，长期保存须置于液氮气相（低于 -120℃）；冻干形式的毒株则用室温无菌双蒸水复水后接入扩增宿主。本文依据 ATCC《Virology Culture Guide》，整理两种形式的接收处理、玻璃安瓿瓶开启、培养物启动与复苏的关键步骤和温度参数。
一、两种运输形式与接收处理
| 运输形式 | 包装方式 | 到货后立即处理 | 不能立即使用时 |
|---|---|---|---|
| 冷冻保存 | 塑料冻存管，置于干冰上运输 | 立即解冻并接种到适当扩增宿主 | 短暂储存于 -70℃ 至 -80℃；长期储存于液氮气相（低于 -120℃） |
| 冻干 | 玻璃安瓿瓶或血清瓶 | 用无菌双蒸水复水后加入适当扩增宿主 | 储存于液氮气相（低于 -120℃） |
为什么不能久放：ATCC 指南明确提示，某些材料在 -120℃ 以上储存时活力会下降。因此 -70℃ 至 -80℃ 只是临时方案，不能替代液氮气相的长期保存。
动手之前先读说明书：每种 ATCC 病毒株均附带产品说明书（Product Sheet），其中包含生产宿主、感染建议等详细信息，可在 ATCC 官网查询。
背景小知识：病毒直径通常为 20~300 纳米，是细胞内专性寄生生物，必须依赖活细胞才能增殖。这也是毒株到货后要尽快接入扩增宿主的原因：病毒离开宿主和合适的保存温度，感染性会随时间下降。
二、玻璃安瓿瓶开启五步法
冻干形式的毒株通常封装在玻璃安瓿瓶中，开启时既要防止割伤，也要防止内容物散播。依据 ATCC 指南：
1）用新鲜配制的 70% 乙醇消毒安瓿瓶外表面；
2）用无菌小锉刀在安瓿瓶颈部刻痕；
3）用无菌纱布包裹安瓿瓶，吸干残余乙醇；
4）在生物安全柜中保持安瓿瓶直立并掰开瓶口，注意纱布不要过湿，防止乙醇被吸入培养物；
5）立即进行病毒扩增。
安全提示：ATCC 指南在保存章节特别列出「打开安瓿瓶时冻干病毒散播」与「玻璃安瓿瓶破裂」为特殊危害，操作务必在生物安全柜内进行，并穿戴防护装备。
三、启动冷冻培养物
3.1 组织培养适应型毒株（7 步）
1）提前准备宿主细胞生长培养基和病毒生长培养基，病毒生长培养基的血清浓度通常较低，为 2~10%；
2）启动推荐的生产宿主，培养单层至适当汇合度；
3）检查证书（COA）上的病毒滴度信息，在 37℃ 水浴中快速解冻（约 2 分钟）；
4）用 70% 乙醇消毒冻存管外表面，在生物安全柜中操作；
5）在基础培养基（无血清）中制备病毒储备液；
6）去除细胞生长培养基，用 PBS 洗涤单层 1~2 次，按最佳感染复数（MOI）接种；
7）按产品说明书推荐的条件进行病毒扩增。
流感病毒特别注意：用于组织培养适应型流感病毒的病毒生长培养基，不应添加胎牛血清（FBS）。
3.2 鸡胚繁殖的毒株（4 步）
1）提前准备鸡胚，在推荐的温度和大气条件下孵育；所有鸡胚需照蛋检查，确认胚胎存活且发育良好，健康胚胎应有气室、发育良好的血管和可见的运动；
2）检查证书滴度信息，在 37℃ 水浴中快速解冻；
3）用 70% 乙醇消毒，在生物安全柜中操作；
4）按鸡胚接种程序接种，可选途径包括尿囊腔、羊膜腔、绒毛尿囊膜与卵黄囊。
四、启动冻干培养物
冻干毒株的启动比冷冻形式更简单，核心是「复水、稀释、接种」三步：
1）按说明书方法打开安瓿瓶（见上文五步法）；
2）无菌加入适量室温的无菌双蒸水，充分混匀；
3）在基础培养基（无血清）中稀释样品，接种宿主细胞以提供最佳 MOI。
要点回顾：复水用的是室温的无菌双蒸水，不是培养液，也不是血清；复水后充分混匀，再以无血清基础培养基稀释后接种。
五、冷冻毒株的复苏要点
除了到货启动，日常实验中从液氮或 -80℃ 冰箱取出自己冻存的病毒储备液时，同样遵循 ATCC 指南的复苏流程：
1）提前培养推荐的生产宿主，使培养基的温度和 pH 达到平衡；
2）在 37℃ 水浴中轻摇解冻；
3）快速解冻至所有冰晶融化，约 2 分钟；
4）用 70% 乙醇消毒冻存管外表面；
5）拧开管盖，按产品说明书接种；
6）孵育适当时间后检查培养物。
原理说明：ATCC 指南指出，冷冻病毒悬浮液通常会导致活力和滴度下降。解冻环节的目标是让病毒在最短时间内从冷冻状态回到液态，减少感染性损失。
六、订购与选型
规范的接收流程是病毒实验成功的第一步。杭州沐昀科技有限公司可协助询价采购 ATCC 标准毒株与相关细胞基质产品（所售产品均为原厂正品），随货资料含产品说明书与滴度信息，电话 15157125312，也可通过页面在线咨询留言，注明所需编号即可。
常见问题
说明与主要参考来源
ATCC《Virology Culture Guide》Getting Started With an ATCC Viral Strain、Preservation 章节（atcc.org）。
本文依据 ATCC 官网公开资料整理，仅供科研与技术参考，不构成实验操作规程。文中操作细节、温度参数与培养基配方请以所购产品的说明书（Product Sheet / COA）及 ATCC 官方 PDF 指南为准。涉及感染性材料的操作须在具备相应生物安全等级的设施中进行，并遵守所在机构与国家的生物安全法规。
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