引言
血清是细胞培养体系里最常用的补充物，也是病毒培养中最容易被忽视的变量。核心要点一句话：胎牛血清（FBS）在细胞生长培养基中的常规浓度为 2%~10%；病毒接种时 ATCC 建议降至 2%，因为血清可能干扰病毒附着；含血清的培养基降解更快，不应冷冻，应在 2~8℃ 储存。本文依据 ATCC《Virology Culture Guide》，整理血清的作用、使用浓度、储存解冻与沉淀处理要点。
一、血清在培养体系中的角色
细胞培养基是盐类、碳水化合物、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素的复杂混合物。补充物可包括激素、生长因子或血清，其中血清是生长因子、蛋白质、维生素、激素、碳水化合物、脂质、氨基酸、矿物质和微量元素的重要来源。胎牛血清（FBS）是最常用的血清，在病毒生长培养基中的常规浓度为 2%~10%。
动物来源产品可能携带外源微生物，正规供应商均对血清做病毒检测。ATCC 建议所有血清使用前通过 0.1 µm 无菌过滤器过滤三次。
二、病毒接种时为什么要降血清到 2%
依据 ATCC 指南：对于病毒接种，建议将血清浓度降至 2%，原因是血清可能干扰病毒附着。两点注意：
1）此建议因毒株而异，不适用于流感病毒；
2）用于组织培养适应型流感病毒的病毒生长培养基，不应添加胎牛血清（FBS）。
实际操作中，宿主细胞先在生长培养基（含血清）中培养至合适状态，接种时去除生长培养基、以基础培养基或低血清浓度的病毒生长培养基稀释病毒接种物即可。
三、基础培养基与血清的搭配
选择哪种基础培养基，应按所用细胞系的产品说明书执行。ATCC 指南列出的常用基础培养基如下：
| 培养基 | 特点 |
|---|---|
| EMEM（30-2003） | 含 Earle 平衡盐、非必需氨基酸、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠；碳酸氢钠 1500 mg/L，适用于 5% CO₂；配方较简单，常需额外补充 |
| DMEM（30-2002） | 氨基酸约为 EMEM 的 2 倍、维生素为 4 倍，另含硝酸铁、丙酮酸钠；常用葡萄糖 4500 mg/L；碳酸氢钠 1500 mg/L 适用 5% CO₂ |
| RPMI-1640（30-2001） | 较高葡萄糖（4500 mg/L）、丙酮酸钠和 HEPES 缓冲；碳酸氢钠 1500 mg/L 适用 5% CO₂ |
| Leibovitz's L-15（30-2008） | 适用于与大气空气自由气体交换，以磷酸盐缓冲、游离碱氨基酸、高浓度丙酮酸钠和半乳糖替代碳酸氢钠/CO₂ 系统；使用 L-15 时 CO₂ 与空气混合对细胞有害，培养瓶盖必须拧紧 |
pH 通过 CO₂/碳酸氢钠、磷酸盐、HEPES 缓冲系统维持，血清本身也有缓冲作用；酚红为 pH 指示剂。
四、含血清培养基与血清的储存
含血清、抗生素或抗真菌剂的培养基降解更快，并且不应冷冻（冷冻可能导致化合物沉淀），应储存在 2~8℃。
血清本身的储存要点：
1）不要在 -20℃ 以上长时间储存；
2）分装储存，避免反复冻融；
3）避免直接光照。
五、血清解冻三步法
依据 ATCC 指南：
1）冷冻血清放入 2~8℃ 冰箱过夜；
2）再放入 37℃ 水浴，偶尔轻摇混匀；
3）不要超过解冻所需的时间，也不要在更高温度解冻：超过 40℃ 且未混匀，可能导致瓶内沉淀。
六、浊度与沉淀：三类常见成因与处理
解冻后的血清出现絮状物或浑浊，多数情况下不影响性能，不必恐慌。ATCC 指南列出了三类常见情形：
| 情形 | 成因 | 处理建议 |
|---|---|---|
| 解冻后出现絮状物或浊度 | 血清保留了部分纤维蛋白原 | 不影响性能，可通过 0.45 µm 过滤去除 |
| 37℃ 或更高温度长时间孵育后出现沉淀 | 沉淀可能含磷酸钙晶体 | 不影响性能 |
| 热灭活处理后出现沉淀 | 加热过程本身可能引起 | 不影响性能；非必需时不建议随意热灭活 |
判断思路：先回想该瓶血清经历过的温度史（解冻方式、孵育时间、是否热灭活），再决定是否继续使用；无法判断时联系供应商。
七、订购与选型
血清质量直接影响细胞状态与病毒滴度数据。杭州沐昀科技有限公司可通过正规渠道协助询价采购胎牛血清等细胞培养试剂与 ATCC 标准毒株，电话 15157125312，也可通过页面在线咨询留言，注明需求即可。
常见问题
说明与主要参考来源
ATCC《Virology Culture Guide》Growth Media for Tissue Culture-adapted Viruses 章节，含常用基础培养基表与血清处理要点（atcc.org）。
本文依据 ATCC 官网公开资料整理，仅供科研与技术参考，不构成实验操作规程。文中浓度、温度等参数请以所购产品的说明书及 ATCC 官方 PDF 指南为准。
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